創(chuàng)傷膿毒癥小鼠腸道和外周血樹突狀細(xì)胞變化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　了解膿毒癥機(jī)體免疫功能紊亂的發(fā)生和發(fā)展，評(píng)估膿毒癥（sepsis）過程中樹突細(xì)胞變化的規(guī)律，深入闡明膿毒癥早期樹突狀細(xì)胞移位改變的重要作用，為下一步治療實(shí)驗(yàn)提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　本實(shí)驗(yàn)在前期研究的基礎(chǔ)上，選取健康清潔級(jí)BALB/c小鼠共50只，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后，將小鼠隨機(jī)均分為實(shí)驗(yàn)組和正常對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組利用輸液BD針建立改良升結(jié)腸支架置入腹膜炎（colon ascendens stent peri

2、tonitis，CASP）膿毒癥小鼠動(dòng)物模型，以小腸為標(biāo)本，運(yùn)用乙二胺四乙酸和膠原酶消化小腸組織，制得小鼠腸道粘膜固有層和腸集合淋巴結(jié)(Peyer’s Patches Peyer結(jié))的單細(xì)胞懸液，在用CD11c抗體標(biāo)記后，進(jìn)行流式分析儀分析，檢測(cè)腸道樹突狀細(xì)胞與外周血樹突細(xì)胞變化，分析亞型CD86和MHC II的表達(dá)變化情況作為比對(duì)。此外，還檢測(cè)IL-10、TNF-a在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的改變。
　　結(jié)果：
　　1.實(shí)驗(yàn)組小鼠外周血

3、TNF-a和IL-10均迅速升高，TNF-a高峰的出現(xiàn)早于IL-10，在改良升結(jié)腸支架置入腹膜炎膿毒癥小鼠模型建立24后的前12小時(shí)，尤其前6小時(shí)TNF-a上升明顯。IL-10水平也很快開始上升，并且持續(xù)的時(shí)間長于TNF-a，直到72小時(shí)后，IL-10的水平仍然較高。正常對(duì)照組小鼠外周血清中TNF-a和IL-10兩種炎癥因子的水平均低于ELISA試劑盒最小可測(cè)范圍。
　　2.模型建立后，實(shí)驗(yàn)組小鼠腸粘膜固有層和腸集合淋巴結(jié)區(qū)（PP

4、結(jié)）樹突狀細(xì)胞比例均高于對(duì)照組。外周血的樹突狀細(xì)胞變化正好相反。外周血中的樹突狀細(xì)胞比例在24小時(shí)后明顯上升超過正常組小鼠。
　　3.模型建立后，實(shí)驗(yàn)組小鼠腸道樹突狀細(xì)胞的CD86和MHC-ll分子明顯低于對(duì)照組。12小時(shí)和24小時(shí)其表達(dá)明顯增強(qiáng)，高于對(duì)照組小鼠。
　　4.實(shí)驗(yàn)組小鼠腸道CD4-CD8+樹突狀細(xì)胞數(shù)量在模型建立后90分鐘后增多明顯，3小時(shí)后腸道固有層和腸集合淋巴結(jié)（PP結(jié)）CD4-CD8+樹突狀細(xì)胞數(shù)量分別為

5、對(duì)照組的36倍和5倍。CD4-CD8-出現(xiàn)的時(shí)間很晚，數(shù)量增多，其增加幅度較CD4-CD8+減小2-3倍。對(duì)照組小鼠腸道腸道樹突狀細(xì)胞亞型CD4、CD8的數(shù)量無變化。
　　結(jié)論：
　　在改良升結(jié)腸支架置入腹膜炎膿毒癥小鼠模型的早期，機(jī)體處于嚴(yán)重的炎癥狀態(tài)時(shí)腸道樹突狀細(xì)胞數(shù)量的激增以及外周血中樹突狀細(xì)胞數(shù)量的顯著下降，是二者發(fā)生了遷移的過程。在膿毒癥后期樹突狀細(xì)胞大量丟失、TNF-a水平下降則預(yù)示機(jī)體免疫細(xì)胞的耗竭,免疫功能低