黃金茶鮮葉中原花青素單體含量及與ANR、LAR表達(dá)的關(guān)系.pdf

1、兒茶素類(lèi)物質(zhì)（原花青素單體）是茶葉的主要活性成分之一，其含量多少和結(jié)構(gòu)類(lèi)型直接影響茶葉品質(zhì)及保健功效。黃金茶是湖南湘西特有、珍稀和優(yōu)質(zhì)的茶樹(shù)資源，具有廣闊的市場(chǎng)開(kāi)發(fā)潛力。目前有關(guān)黃金茶中原花青素類(lèi)次生代謝物的研究涉及甚少，關(guān)于其生物合成機(jī)理的研究仍是空白。本研究以黃金茶1號(hào)和2號(hào)品系為實(shí)驗(yàn)材料，研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：
　?。?）采用有機(jī)溶劑萃取法提取春、夏和秋季黃金茶不同發(fā)育時(shí)期鮮葉中原花青素，利用HPLC同時(shí)測(cè)定兒茶素(C)、表兒

2、茶素(EC)、沒(méi)食子兒茶素(GC)、表沒(méi)食子兒茶素(EGC)和表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)的含量，并分析其分布規(guī)律。結(jié)果表明，夏季各原花青素單體含量最高，春季最低，即夏季>秋季>春季；從組成分布和變化規(guī)律來(lái)看，春季葉片中，EGC和EGCG含量相對(duì)較高，其他單體含量較低；各單體含量均隨著葉片發(fā)育先上升然后下降。夏季葉片中，EGC和C相對(duì)較高；各單體含量也隨葉片發(fā)育先升高再降低；秋季葉片中，EC和EGCG含量相對(duì)較高；各原花青素含量

3、也表現(xiàn)出先上升后下降的趨勢(shì)。兩個(gè)品系在兒茶素類(lèi)物質(zhì)的生物積累和變化方面無(wú)顯著差別。
　?。?）采用RT-PCR法從黃金茶幼嫩葉片中分離無(wú)色花青素還原酶基因（LAR）花青素還原酶基因（ANR），克隆至 T載體進(jìn)行測(cè)序和生物信息學(xué)分析。成功獲得了CsLAR和CsANR基因，序列分析表明兩基因全長(zhǎng)為1044 bp和1029 bp，預(yù)測(cè)分別編碼347 aa和342 aa的蛋白質(zhì)，生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)兩基因編碼蛋白理化性質(zhì)和三維結(jié)構(gòu)基本與其對(duì)

4、應(yīng)的無(wú)色花青素還原酶家族和花青素還原酶家族蛋白特征一致。
　　（3）以β-actin為內(nèi)參基因，通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR研究了CsANR、CsLAR在不同季節(jié)、不同發(fā)育時(shí)期黃金茶葉片中的表達(dá)模式，分析原花青素4種相關(guān)單體（C和GC、EC和EGC）分布與CsLAR、CsANR表達(dá)水平的關(guān)系。結(jié)果顯示，在春季和秋季，CsANR、CsLAR表達(dá)量與原花青素各單體含量變化趨勢(shì)一致。在夏季，黃金茶1號(hào)鮮葉中CsANR表達(dá)量與對(duì)應(yīng)原花青素單體（EC

5、和EGC）含量變化趨勢(shì)一致，CsLAR表達(dá)量與對(duì)應(yīng)原花青素單體無(wú)相關(guān)性；黃金茶2號(hào)鮮葉中CsLAR表達(dá)量與對(duì)應(yīng)原花青素單體（C和GC）含量變化趨勢(shì)一致，CsANR表達(dá)水平與對(duì)應(yīng)原花青素單體含量無(wú)相關(guān)性?？傮w而言，在春季，黃金茶鮮葉中CsANR與CsLAR的表達(dá)量基本一致，夏、秋季黃金茶鮮葉中CsLAR的表達(dá)量要高于CsANR的表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，EGC和EGCG是黃金茶1號(hào)和2號(hào)品系中兒茶素類(lèi)活性物質(zhì)的主要成分；茶葉中原花青素單體總量