MMTV通過Wnt信號通路誘導TA2小鼠乳腺癌的發(fā)生.pdf

1、目的:津白Ⅱ(Tientsin Albinao2,TA2)小鼠具有高自發(fā)性乳腺癌特點,是研究人乳腺癌的良好動物模型,本研究通過研究Wnt通路相關蛋白、小鼠乳腺腫瘤病毒(mouse mammary tumor virus,MMTV)在TA2小鼠乳腺癌生成中的作用,闡述TA2小鼠自發(fā)性乳腺癌發(fā)生相關機制。
　　方法:
　　1.正常雌性成年處女TA2小鼠60只,鼠齡6～8周,體重20~25g,將小鼠去勢后隨機分成四組,聯(lián)合給藥組(

2、CT組,給藥劑量17β-雌二醇0.02mg+孕酮0.2mg溶解于0.1ml麻油中)、雌二醇組(E組,給藥劑量17β-雌二醇0.02mg溶解于0.1ml麻油中)、孕酮組(P組,給藥劑量孕酮0.2mg溶解于0.1ml麻油中)及對照組(C組,給予0.1ml純麻油),給藥頻率1次/2周,10月后觀察雌激素、孕激素對TA2小鼠乳腺腫瘤生成數(shù)量的影響,并分析雌激素、孕激素在TA2小鼠乳腺癌發(fā)生過程中的作用。
　　2.Real-time PCR

3、方法分別檢測腫瘤及乳腺組織中 MMTV-LTR mRNA、Wnt1 mRNA、Wnt5a mRNA、Wnt5b mRNA、Wnt10b mRNA表達水平并分析其相關性。RT-PCR方法檢測各組小鼠腫瘤及乳腺組織中MMTV-LTR mRNA表達。
　　3.免疫組織化學技術檢測TA2小鼠正常乳腺組織、自發(fā)性成瘤TA2小鼠乳腺癌前病變組織及腫瘤組織中Wnt1、Wnt5a、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)的表達。進一步統(tǒng)計分析Wnt1、

4、Wnt5a、β-catenin在TA2小鼠正常乳腺組、自發(fā)性成瘤TA2小鼠乳腺癌前病變組及腫瘤組中腫瘤陽性細胞表達率,并分別比較差異性。
　　結果:
　　1.15只聯(lián)合給藥組小鼠中有10只在連續(xù)給藥10月后發(fā)瘤(腫瘤發(fā)生率66.7％),而其他三組無一例發(fā)瘤(腫瘤發(fā)生率0%)。聯(lián)合給藥組中,10只小鼠的腫瘤均為單發(fā),5個小鼠腫瘤定位于左下腹,3個小鼠腫瘤定位于右下腹,兩個小鼠腫瘤位于頸部。聯(lián)合給藥組小鼠乳腺癌細胞呈巢狀、實體和

5、腺管狀排列,細胞核分裂象多見;聯(lián)合給藥組小鼠乳腺導管不規(guī)則,有些導管形成囊狀結構,乳腺導管比正常乳腺導管大;雌激素組、和孕激素組小鼠的乳腺導管規(guī)則,導管上皮細胞形態(tài)沒有明顯異常;而對照組小鼠乳腺導管萎縮,為脂肪組織所替代。
　　2.Real-time PCR結果顯示:Wnt1 mRNA、Wnt5a mRNA、Wnt5b mRNA、Wnt10b mRNA在聯(lián)合給藥組小鼠乳腺組織表達水平最高,同時對照組小鼠乳腺上皮細胞中表達水平最低,

6、兩組之間分別比較,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。較其他組比較,聯(lián)合給藥組小鼠腫瘤及乳腺組織中MMTV-LTR mRNA表達量較高,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。
　　3.免疫組織化學檢測結果提示:Wnt1、Wnt5a在小鼠正常乳腺組織中陰性表達,在自發(fā)性成瘤小鼠乳腺癌前病變和乳腺癌組織細胞質(zhì)表達且在自發(fā)性成瘤小鼠乳腺癌前病變的表達強度高于其在乳腺癌組織中表達。β-catenin在正常小鼠乳腺組織主要在細胞膜上表達,在自

7、發(fā)性成瘤TA2小鼠乳腺癌前病變組織及腫瘤組織胞質(zhì)中均有異常表達,且在腫瘤組織的表達強度高于其在癌前病變組織中的表達。Wnt1、Wnt5a、β-catenin在自發(fā)性成瘤小鼠乳腺癌前病變組、腫瘤組中的陽性細胞表達率顯著高于正常乳腺組,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。Wnt1、Wnt5a在小鼠乳腺癌前病變組細胞陽性率高于腫瘤組,其中 Wnt1差異有統(tǒng)計學意義(P=0.001),Wnt5a差異無統(tǒng)計學意義(P=0.239)。β-caten

8、in在腫瘤組的腫瘤細胞陽性率明顯高于乳腺癌前病變組,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.005)。
　　結論:
　　1.在構建的TA2小鼠動物模型中,雌孕激素聯(lián)合給藥促進TA2小鼠乳腺腫瘤形成。MMTV及Wnt信號通路相關蛋白在TA2小鼠乳腺癌組織中表達異常,可能在TA2小鼠乳腺癌形成過程中發(fā)揮重要作用。
　　2.在TA2小鼠自發(fā)性乳腺癌組織中,Wnt信號通路相關蛋白表達異常,提示它們在TA2小鼠自發(fā)性乳腺癌形成過程中發(fā)揮重要作