川崎病循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞和其表面S100A12蛋白的研究.pdf

1、【目的】：川崎病(Kawasaki disease,KD)又稱皮膚粘膜淋巴結(jié)綜合征(MucocutaneousLymphnode Syndrome,MCLS),是小兒時(shí)期的一種急性發(fā)熱性血管炎,主要影響中小型動(dòng)脈,特別是冠狀動(dòng)脈,雖然及時(shí)靜脈注射丙種球蛋白(IntravenousImmunoglobulin,IVIG)可以縮短病程和減少冠狀動(dòng)脈病變(Coronary ArteryLesions,CAL)的發(fā)生率,仍約有10％的病人對(duì)注射

2、IVIG沒有反應(yīng),而這些病人有很高的CAL發(fā)生率。在許多國家KD已成為兒童最常見的獲得性心臟病,也是成人CAL的病因之一。CAL的發(fā)生原因和機(jī)制至今未明,并且尚無早期判斷IVIG耐藥(Intravenous immunoglobulin non-responder,IVIG-NR)和CAL的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞(Circulating endothelial cells,CECs)及S100A12蛋白作為血管病變和炎癥調(diào)節(jié)的指標(biāo),近

3、年來引起國內(nèi)外學(xué)者的高度關(guān)注。為了明確CECs和其表面S100A12蛋白與KD的關(guān)系,本研究采用單克隆抗體與流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry,FCM)結(jié)合的手段進(jìn)行檢測和分析,評(píng)價(jià)KD病患者外周血循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞比值(Ratio of CECs to mono-nuclear cells,CECs/MNC)、循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞上S100A12蛋白陽性率(Positive rate of S100A12 on CECs,CECs-

4、S100A12/CECs)及循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞上S100A12蛋白熒光強(qiáng)度(Flourescentintensity of S100A12 on CECs,FI-S100A12-CECs),探討川崎病CAL可能的病理生理機(jī)制,并為KD臨床治療及預(yù)后判斷提供依據(jù)。
　　【材料與方法】：1、病例與分組:1.1急性期川崎病組(Acute stage of Kawasaki Disease,A-KD)55人,男29例,女26例;年齡3～128月

5、,平均34.00±25.80月,確診后給予大劑量IVIG及阿斯匹林治療。IVIG劑量:1g/kg/d,連續(xù)2天(起病10天內(nèi)使用),其中IVIG-NR5例,伴CAL者9例。1.2亞急性期川崎病組(Subacute stage of Kawasaki Disease,SA-KD)29人,男18例,女11例;年齡6-128月,平均35.55±31.99月,其中IVIG-NR者6例,伴CAL者9例。1.3恢復(fù)期川崎病組(Convalescen

6、t stage of Kawasaki Disease,C-KD)14人,男8例,女6例;年齡7-72月,平均33.29±23.62月,其中IVIG-NR者5例,伴CAL者6例。1.4正常對(duì)照組(Control)26人,均來自我院兒保門診健康體檢兒童,其中男13例,女13例;年齡4-85月,平均23.92±19.87月。2、FCM測定:采用單克隆抗體與FCM結(jié)合方法進(jìn)行檢測和分析,評(píng)價(jià)KD患者外周血CECs/MNC、CECs-S100A

7、12/CECs和FI-S100A12-CECs。3、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件,正態(tài)分布的資料組內(nèi)行One-WayANOVE分析,組間行LSD檢驗(yàn);非正態(tài)分布的資料用Mann-Whitney Test檢驗(yàn);P＜0.05為差異有顯著性。正態(tài)分布資料采用均值士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,非正態(tài)分布資料用中位數(shù)(2.5-97.5)%表示。
　　【結(jié)果】：1、KD外周血CECs/MNC、CECs-S100A12/CECs和FI-S

8、100A12-CECs的變化:A-KD患者外周血CECs/MNC、CECs-S100A12/CECs和FI-S100A12-CECs均明顯升高,分別為0.39(0.04-11.10)%、67.58±24.45%、214.00(9.99-2511.80)。正常對(duì)照組分別為0.24(0.05-1.10)%、39.35±19.58%、23.26(12.07-237.30);兩組比較P值均＜0,05。應(yīng)用WIG后SA-KD患者外周血CECs/M

9、NC、CECs-S100A12/CECs和FI-S100A12-CECs分別為0.16(0.01-1.00)%、65.99±22.40%、246.00(17.40-2613.00),與應(yīng)用IVIG前A-KD比較,CECs/MNC明顯下降(P=0.001)。C-KD患者CECs/MNC則基本恢復(fù)到正常水平0.24(0.06-1.70)%。但無論在SA-KD,還是在C-KD,CECs-S100A12/CECs和FI-S100A12-CECs

10、仍保持較高水平。2、IVIG-NR與IVIG敏感(IVIG responder,IVIG-R)KD患者外周血CECs/MNC、CECs-S100A12/CECs和FI-S100A12-CECs的變化:IVIG-NR-A-KD組外周血CECs/MNC、CECs-S100A12/CECs和FI-S100A12-CECs分別為0.38(0.13-6.25)%、69.34±26.81%、110.40(23.39-1622.00)。IVIG-R-

11、A-KD組分別為0.40(0.04-11.48)%、67.41±24.49%、228.15(9.88-2669.95)。兩組比較差異無顯著性,P值均＞0.05。IVIG-R-SA-KD外周血CECs/MNC為0.15(0.01-1.00)%,與IVIG-R-A-KD比較有明顯下降(P＜0.01)。IVIG-NR-SA-KD外周血CECs/MNC為0.29(0.11-0.65)%,與IVIG-NR-A-KD比較無明顯下降。3、KD合并冠脈

12、病變(KD-CAL)及冠脈正常組(KD-No-CAL)外周血CECs/MNC、CECs-S100A12/CECs和FI-S100A12-CECs的變化:A-KD-CAL組外周血CECs/MNC、CECs-S100A12/CECs和FI-S100A12-CECs分別為0.36(0.07-0.70)%、62.50±26.37%、119.00(9.25-3105.00)。A-KD-No-CAL組分別為0.50(0.03-11.79)%、68.

13、58±24.24%、264.50(10.76-1604.68)。兩組比較差異無顯著性,P值均＞0.05。SA-KD-No-CAL組外周血CECs/MNC為0.15(0.01-1.00)%,與A-KD-No-CAL比較下降明顯(P＜0.01)。SA-KD-CAL組外周血CECs/MNC為0.21(0.08-0.83)%,與A-KD-CAL比較無明顯下降。
　　【結(jié)論】：1.A-KD患者外周血CECs/MNC明顯升高,提示A-KD患者

14、血管內(nèi)皮受炎癥因子攻擊,其血管內(nèi)皮細(xì)胞脫落明顯增加;在SA-KD CECs/MNC不下降或下降緩慢可作為IVIG-NR-KD及KD-CAL的指標(biāo)之一。2.與A-KD相比,IVIG治療后的SA-KD及C-KD,外周血CECs/MNC明顯降低,提示W(wǎng)IG可能通過抑制炎癥因子對(duì)血管內(nèi)皮的攻擊,減少血管內(nèi)皮細(xì)胞脫落起到治療和預(yù)防CAL的作用。3.外周血CECs-S100A12/CECs和FI-S100A12-CECs可作為A-KD臨床輔助診斷指