KIAA1267和PRH1基因拷貝數(shù)變異與先天性心臟病相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：檢測KIAA1267(KAT8 regulatory NSL complex subunit 1)和PRHl(proline-rich protein HaeⅢ subfamily1)基因拷貝數(shù)變異（Copy number variations，CNVs）在人群中的發(fā)生率，探討其與先天性心臟病的相關(guān)性。
　　 方法：本研究以散發(fā)的330例先天性心臟病(Congenital Heart Disease，CHD)患兒和一個CH

2、D家系、300例正常對照為研究對象，采用實時熒光定量PCR(Real-time Polymerase Chain Reaction，Real-timePCR)技術(shù)對前期實驗中采用微陣列比較基因組雜交芯片(array-based Comparative Genomic Hybridization，aCGH)篩選出的候選基因KIAA1267和PRH1擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗證，檢測其在人群中拷貝數(shù)變異情況及發(fā)生率，并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　

3、結(jié)果：1．散發(fā)性先天性心臟病患兒樣本KIAA1267基因拷貝數(shù)檢測及統(tǒng)計分析：
　　 (1)330例先天性心臟病患兒樣本經(jīng)KIAA1267-1、KIAA1267-2兩對引物檢測及三復(fù)孔驗證，確定檢出8例樣本在KIAA1267基因區(qū)域有片段缺失,322例樣本未見拷貝數(shù)異常。正常對照組300例樣本在KIAA1267基因區(qū)域均未檢出片段缺失。
　　 (2)對檢測出有片段缺失的8例陽性樣本采用KIAA1267-3和KIAA126

4、7-6引物進(jìn)行邊界定位，發(fā)現(xiàn)8例樣本存在大小不等的片段缺失，其中編號為1OHD173-1和10HD318-1的樣本在引物KIAA1267-2所在區(qū)域附近還存在多拷貝的變異，即缺失和擴(kuò)增并發(fā)。
　　 (3)先天性心臟病實驗組KIAA1267基因拷貝數(shù)變異率大于正常對照組(X2=0.008，P＜0.01)。
　　 2．散發(fā)性先天性心臟病患兒樣本PRH1基因拷貝數(shù)檢測及統(tǒng)計分析：
　　 (1)采用PRH1-2引物（擴(kuò)增

5、片段位于PRH1基因上游）進(jìn)行檢測，在200例先天性心臟病患兒樣本中檢出零拷貝59例(29.50％)，單拷貝23例(11.50%)，雙拷貝98例(49．00%)，多拷貝20例(10.00%)；于120例正常對照樣本中檢出零拷貝14例(11.67%)，單拷貝23例(19.17%)，雙拷貝77例(64.17%)，多拷貝6例(5．00%)。對兩組樣本的檢測結(jié)果根據(jù)拷貝數(shù)情況分為四個等級進(jìn)行統(tǒng)計，并運(yùn)用統(tǒng)計軟件SPSS17.0進(jìn)行兩獨立樣本等級

6、資料比較的秩和檢驗，得出Z=-4.386，P＜0.01，具有顯著差異，即先天性心臟病實驗組PRH1基因拷貝數(shù)變異率大于正常對照組。
　　 (2)經(jīng)三復(fù)孔驗證及PRH1基因上游序列的引物PRH1-3、PRH1-4驗證，與以上1實驗結(jié)果相同。
　　 (3)對上述實驗檢測結(jié)果為單拷貝的陽性樣本用PRH1-5引物（擴(kuò)增片段位于PRH1基因內(nèi)）進(jìn)行檢測，結(jié)果全部為雙拷貝。
　　 3．先天性心臟病家系兩基因檢測情況：

7、　　 (1)CHD家系中四人(Ⅰ1、Ⅰ2、Ⅱ2、Ⅱ3)在KIAA1267基因區(qū)域均未檢出片段缺失或擴(kuò)增。
　　 (2)家系中Ⅰ2、Ⅱ2樣本基因組DNA在以PRH1-2為引物的實驗中為零拷貝，Ⅰ1、Ⅱ3則為單拷貝；在以PRH1-5為引物的實驗中四人均為雙拷貝。
　　 結(jié)論：
　　 1.KIAA1267基因經(jīng)檢測及統(tǒng)計學(xué)分析，提示兩組樣本實驗結(jié)果有顯著差異(X2=0.008，P＜0.01)，考慮KIAA1267可能