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文檔簡介
1、背景:妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥(ICP)是妊娠期特有的并發(fā)癥,至今仍缺少有效的防治措施。ICP最顯著的特點就是孕母血膽汁酸水平增高,研究證明高水平的膽汁酸是增加胎兒風(fēng)險的重要因素。高膽汁酸不僅見于母血,其胎兒臍血、羊水胎糞的膽汁酸水平相比正常孕婦也顯著增高,提示胎盤膽汁酸轉(zhuǎn)運異常是ICP危害胎兒的重要機制。有機陰離子轉(zhuǎn)運體OATP1B3存在于胎盤組織并具有膽汁酸和膽紅素轉(zhuǎn)運功能,本課題組前期研究表明ICP孕婦胎盤組織中OATP1B3表達下調(diào)
2、,首次利用體外滋養(yǎng)細(xì)胞模型研究發(fā)現(xiàn)OATP1B3能特異性的轉(zhuǎn)運GCA、GCDCA兩種膽汁酸。多項研究表明胎盤中OATP1B3參與了母胎間膽汁酸的轉(zhuǎn)運,研究s-腺苷蛋氨酸(SAMe)和熊去氧膽酸(UDCA)對滋養(yǎng)細(xì)胞OATP1B3的表達的影響具有重要的臨床意義,這將為人類胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞膽汁酸轉(zhuǎn)運特征及胎兒風(fēng)險防范提供理論依據(jù)。
目的:研究s-腺苷蛋氨酸(SAMe)和熊去氧膽酸(UDCA)對胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞OATP1B3表達的影響,為人
3、類胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞膽汁酸轉(zhuǎn)運特征及胎兒風(fēng)險防范提供理論依據(jù)。
方法:應(yīng)用MTT法檢測s-腺苷蛋氨酸(SAMe)和熊去氧膽酸(UDCA)對SWAN細(xì)胞的增殖作用,以不同的藥物濃度作用于SWAN細(xì)胞不同的時間,用RT Real-time PCR和Western blot檢測藥物對OATP1B3的mRNA和蛋白表達的影響。
結(jié)果:(1) MTT法:UDCA以20μM、50μM濃度作用24h、48h、72h對細(xì)胞無明顯毒性作用(
4、P>0.05);SAMe以5μM、10μM、15μM、20μM、35μM濃度作用24h、48h、72h對細(xì)胞無明顯毒性作用(P>0.05);(2)UDCA、SAMe對OATP1B3表達的影響:a.Real-time PCR檢測20μM、50μMUDCA作用于swan細(xì)胞24h后OATP1B3mRNA表達分別上調(diào)了14%、20%,48h后分別上調(diào)了43%、66%,其中50μMUDCA處理組和對照組差異有明顯的意義(P<0.05);15μM
5、、35μM的SAMe作用于swan細(xì)胞24h后mRNA分別上調(diào)了83%、320%(P<0.05)。15μM、35μM的SAMe作用于swan細(xì)胞48h后分別上調(diào)了48%、191%(P<0.05)。15μMSAMe24h、48h組和35μMSAMe24h、48h組分別比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。b.Western blot檢測20μM、50μMUDCA作用于swan細(xì)胞48h后OATP1B3蛋白表達分別上調(diào)了1%、146%,其中
6、50μMUDCA組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);Western blot檢測15μM、35μM的SAMe作用于swan細(xì)胞48h后OATP1B3蛋白表達分別上調(diào)了31%、28%(P<0.05);
結(jié)論:(1)UDCA在50μM以下濃度72h內(nèi)對Swan細(xì)胞沒有明顯的毒性作用;SAMe在35μM以下濃度72h內(nèi)對Swan細(xì)胞沒有明顯的毒性作用。(2)熊去氧膽酸(UDCA)和腺苷蛋氨酸(SAMe)可以上調(diào)胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞OATP1
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