大容量全肺灌洗治療塵肺犬的實驗研究.pdf

1、目的：研究大容量全肺灌洗對塵肺犬的治療機制 方法： (1)12只本地健康雜種犬隨機分為兩組：正常對照組，塵肺犬模型組。對照組以無菌生理鹽水灌肺，塵肺模型組于第1天和第20天分別向肺內(nèi)灌入粉塵懸液，于灌肺第1天計時起至第60天后分別對兩實驗組犬進(jìn)行大容量全肺灌洗術(shù)，收集灌洗回收液。(2)定量灌洗回收液后，分三部分進(jìn)行實驗：①取一定量灌洗回收液標(biāo)本，離心處理，對沉淀物進(jìn)行烘干至恒重，比較對照組和塵肺組的清除物干重與標(biāo)本液量之

2、比值；清除物經(jīng)高溫灰化至恒重得到粉塵含量，再次比較兩組的粉塵含量與標(biāo)本液量之比值。②取少量灌洗回收液，對對照組和塵肺組分別計數(shù)細(xì)胞總數(shù)，灌洗液離心得到細(xì)胞團(tuán)，振散細(xì)胞團(tuán)后涂片，對細(xì)胞分類(巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞)，并計數(shù)比重；③灌洗回收液低溫離心獲得肺泡巨噬細(xì)胞(AM)，將塵肺組和對照組稀釋成同樣細(xì)胞密度種植培養(yǎng)，培養(yǎng)18h后分別采用ELISA法測定每組AM培養(yǎng)上清液TGF-β1分泌水平；培養(yǎng)24h后采用 Western Blot法

3、檢測AM內(nèi)MMP2及MMP9蛋白含量，RT-PCR檢測 MMP2及MMP9的mRNA表達(dá)。 結(jié)果： (1)塵肺組灌出的清除物與標(biāo)本液量比值與對照組有顯著差異(p＜0.01)，塵肺組粉塵含量與標(biāo)本液量比值較對照組有明顯增多(p＜0.01)。(2)全肺灌洗回收液中，塵肺組細(xì)胞總數(shù)明顯高于對照組(p＜0.01)，塵肺組肺泡巨噬細(xì)胞分類數(shù)高于對照組(p＜0.05)；兩組間灌洗液回收率、淋巴細(xì)胞與中性粒細(xì)胞分類數(shù)無顯著差異(p＞0

4、.05)。(3)分離培養(yǎng)的AM上清液中，塵肺組的TGF-β1蛋白含量較對照組明顯升高(p＜0.05)；在塵肺組中，AM內(nèi)MMP2、MMP9的蛋白與mRNA表達(dá)水平明顯高于對照組水平(p＜0.01)。 結(jié)論：(1)塵肺犬模型組肺內(nèi)的粉塵能被大容量全肺灌洗術(shù)清除，對防治塵肺病起到一定作用。(2)大容量灌洗能洗脫塵肺犬模型肺內(nèi)大量炎癥細(xì)胞，特別是對AM的的大量洗出起到阻止和延緩塵肺病的病情進(jìn)展的作用。(3)表達(dá)于AM內(nèi)的部分炎癥因子的