特發(fā)性高草酸尿癥大鼠模型空腸組織的基因表達譜和蛋白組學研究.pdf

1、本文內(nèi)容分為兩部分：
　　第一部分
　　特發(fā)性高草酸尿癥大鼠模型空腸組織差異表達基因的篩選研究
　　目的：特發(fā)性高草酸尿癥的發(fā)生可能與內(nèi)源性草酸生成增多和外源性草酸吸收增加有關,由于缺乏理想的動物模型,目前國際上對特發(fā)性高草酸尿癥分子生物學發(fā)病機制的研究尚屬空白。我們成功建立了特發(fā)性高草酸尿癥的大鼠模型,在此基礎上先期分析特發(fā)性高草酸尿癥大鼠空腸組織基因表達譜的變化,篩選可能導致其發(fā)病的相關基因,探討特發(fā)性高草酸尿癥在

2、外源性草酸來源方面的發(fā)病機制。
　　方法：應用基因表達譜芯片,檢測3只特發(fā)性高草酸尿癥模型大鼠和正常大鼠空腸組織基因表達差異,對差異表達基因進行生物信息學分析。
　　結果：在特發(fā)性高草酸尿癥大鼠與正常大鼠空腸組織之間存在差異表達基因720條,其中上調(diào)基因517條,下調(diào)基因203條,包括細胞信號轉導、DNA結合與轉錄、ATP結合、離子結合與轉運、細胞受體、免疫相關、細胞周期蛋白、細胞骨架、代謝蛋白等多種基因。KEGG信號通路分

3、析顯示239個通路功能改變差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結論：基因芯片能有效的篩選出特發(fā)性高草酸尿癥模型大鼠空腸中的差異基因,顯著差異表達基因與其發(fā)病機理可能存在相關性。
　　第二部分
　　特發(fā)性高草酸尿癥大鼠模型空腸組織蛋白質組二維電泳可行性研究
　　目的：在對樣品進行正式的雙向凝膠電泳實驗前,需要對該樣品的雙向電泳進行可行性評價,為雙向凝膠電泳實驗的順利進行奠定實驗基礎。
　　方法：取1只特發(fā)

4、性高草酸尿大鼠和正常對照大鼠的空腸組織300mg,勻漿提取組織總蛋白,以雙向電泳技術分離蛋白質,銀染后掃描獲得的圖譜,并以 ImageMasterTM2D Platinum software(Version5.0)軟件進行分析。
　　結果：獲得了清晰、穩(wěn)定的凝膠蛋白圖譜,正常大鼠凝膠圖譜可檢測到2541個蛋白點,特發(fā)性高草酸尿癥大鼠凝膠圖譜可檢測到2654個蛋白點。
　　結論：2個蛋白質樣品的二維電泳圖譜顯示了蛋白質點的穩(wěn)定

5、遷移,進一步保證了需要進行正式雙向凝膠電泳實驗的樣品能具有較好的可行性和重復穩(wěn)定性。
　　第三部分
　　特發(fā)性高草酸尿癥大鼠模型空腸組織差異蛋白質的篩選研究
　　目的：尋找特發(fā)性高草酸尿癥大鼠空腸組織差異表達的蛋白質,探討特發(fā)性高草酸尿癥在外源性草酸來源方面的發(fā)病機制。
　　方法：雌性特發(fā)性高草酸尿癥大鼠和正常大鼠各3只,切取500mg的空腸組織后提取其總蛋白。以二維凝膠電泳(2-DE)技術分離空腸中的全部蛋白質

6、并進行差異表達蛋白質篩選,應用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)鑒定二維電泳篩選出來的差異表達蛋白質,最后應用Gene Ontology軟件對差異蛋白質進行功能分類和細胞定位。
　　結果：獲得了分辨率和重復性均較好的凝膠蛋白圖譜,通過2-DE篩選出差異表達的蛋白質點40個,其中在特發(fā)性高草酸尿癥空腸組織中表達上調(diào)的蛋白質點有31個,表達下調(diào)的蛋白質點有9個,最終有34個差異蛋白質點被鑒定確認,高表達25個