特發(fā)性高草酸尿癥大鼠模型空腸組織的基因表達(dá)譜和蛋白組學(xué)研究.pdf

1、本文內(nèi)容分為兩部分：
　　第一部分
　　特發(fā)性高草酸尿癥大鼠模型空腸組織差異表達(dá)基因的篩選研究
　　目的：特發(fā)性高草酸尿癥的發(fā)生可能與內(nèi)源性草酸生成增多和外源性草酸吸收增加有關(guān),由于缺乏理想的動(dòng)物模型,目前國際上對特發(fā)性高草酸尿癥分子生物學(xué)發(fā)病機(jī)制的研究尚屬空白。我們成功建立了特發(fā)性高草酸尿癥的大鼠模型,在此基礎(chǔ)上先期分析特發(fā)性高草酸尿癥大鼠空腸組織基因表達(dá)譜的變化,篩選可能導(dǎo)致其發(fā)病的相關(guān)基因,探討特發(fā)性高草酸尿癥在

2、外源性草酸來源方面的發(fā)病機(jī)制。
　　方法：應(yīng)用基因表達(dá)譜芯片,檢測3只特發(fā)性高草酸尿癥模型大鼠和正常大鼠空腸組織基因表達(dá)差異,對差異表達(dá)基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析。
　　結(jié)果：在特發(fā)性高草酸尿癥大鼠與正常大鼠空腸組織之間存在差異表達(dá)基因720條,其中上調(diào)基因517條,下調(diào)基因203條,包括細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、DNA結(jié)合與轉(zhuǎn)錄、ATP結(jié)合、離子結(jié)合與轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞受體、免疫相關(guān)、細(xì)胞周期蛋白、細(xì)胞骨架、代謝蛋白等多種基因。KEGG信號通路分

3、析顯示239個(gè)通路功能改變差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：基因芯片能有效的篩選出特發(fā)性高草酸尿癥模型大鼠空腸中的差異基因,顯著差異表達(dá)基因與其發(fā)病機(jī)理可能存在相關(guān)性。
　　第二部分
　　特發(fā)性高草酸尿癥大鼠模型空腸組織蛋白質(zhì)組二維電泳可行性研究
　　目的：在對樣品進(jìn)行正式的雙向凝膠電泳實(shí)驗(yàn)前,需要對該樣品的雙向電泳進(jìn)行可行性評價(jià),為雙向凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：取1只特發(fā)

4、性高草酸尿大鼠和正常對照大鼠的空腸組織300mg,勻漿提取組織總蛋白,以雙向電泳技術(shù)分離蛋白質(zhì),銀染后掃描獲得的圖譜,并以 ImageMasterTM2D Platinum software(Version5.0)軟件進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：獲得了清晰、穩(wěn)定的凝膠蛋白圖譜,正常大鼠凝膠圖譜可檢測到2541個(gè)蛋白點(diǎn),特發(fā)性高草酸尿癥大鼠凝膠圖譜可檢測到2654個(gè)蛋白點(diǎn)。
　　結(jié)論：2個(gè)蛋白質(zhì)樣品的二維電泳圖譜顯示了蛋白質(zhì)點(diǎn)的穩(wěn)定

5、遷移,進(jìn)一步保證了需要進(jìn)行正式雙向凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的樣品能具有較好的可行性和重復(fù)穩(wěn)定性。
　　第三部分
　　特發(fā)性高草酸尿癥大鼠模型空腸組織差異蛋白質(zhì)的篩選研究
　　目的：尋找特發(fā)性高草酸尿癥大鼠空腸組織差異表達(dá)的蛋白質(zhì),探討特發(fā)性高草酸尿癥在外源性草酸來源方面的發(fā)病機(jī)制。
　　方法：雌性特發(fā)性高草酸尿癥大鼠和正常大鼠各3只,切取500mg的空腸組織后提取其總蛋白。以二維凝膠電泳(2-DE)技術(shù)分離空腸中的全部蛋白質(zhì)

6、并進(jìn)行差異表達(dá)蛋白質(zhì)篩選,應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)鑒定二維電泳篩選出來的差異表達(dá)蛋白質(zhì),最后應(yīng)用Gene Ontology軟件對差異蛋白質(zhì)進(jìn)行功能分類和細(xì)胞定位。
　　結(jié)果：獲得了分辨率和重復(fù)性均較好的凝膠蛋白圖譜,通過2-DE篩選出差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)40個(gè),其中在特發(fā)性高草酸尿癥空腸組織中表達(dá)上調(diào)的蛋白質(zhì)點(diǎn)有31個(gè),表達(dá)下調(diào)的蛋白質(zhì)點(diǎn)有9個(gè),最終有34個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)被鑒定確認(rèn),高表達(dá)25個(gè)