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文檔簡介
1、目的:
1. 應用特異性siRNA沉默多發(fā)性骨髓瘤RPMI8226細胞plexin-B1基因并檢測其沉默效應;
2. 探討plexin-B1 沉默及沙利度胺體外單用或聯用對多發(fā)性骨髓瘤RPMI8226細胞凋亡的影響。
方法:
1. 從RPMI8226細胞中提取總RNA,利用特異性引物,RT-PCR擴增觀察plexin-B1及其配體Sema4D的表達;
2. 利用脂質
2、體法將特異性plexin-B1siRNA轉染至RPMI8226細胞,實時定量PCR分析轉染前后plexin-B1 mRNA的表達變化;
3. Plexin-B1沉默及沙利度胺體外單用或聯合作用于RPMI8226細胞后,AnnexinⅤ-PI雙染法,流式細胞儀檢測細胞凋亡情況;半定量RT-PCR檢測caspase-3 mRNA表達變化。
結果:
1. 多發(fā)性骨髓瘤RPMI8226高表達plexin
3、-B1基因及其配體Sema4D;
2. 特異性plexin-B1siRNA轉染至RPMI8226細胞可引起plexin-B1基因表達下調;
3.(1)轉染特異性plexin-B1siRNA的RPMI8226細胞凋亡率明顯增加;(2)沙利度胺可誘導RPMI8226細胞凋亡,且在一定濃度范圍內細胞凋亡率隨藥物濃度增大而增高;(3)特異性 plexin-B1siRNA聯合沙利度胺作用于RPMI8226細胞后,細胞凋
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