全外顯子測序發(fā)現(xiàn)遺傳性心臟傳導(dǎo)疾病致病基因SCN5A新突變.pdf

1、背景:全外顯子測序是近年來逐步興起的一種第二代測序技術(shù)。通過外顯子捕獲芯片以及邊合成邊測序技術(shù)，全外顯子測序可在極短時(shí)間內(nèi)獲得海量的測序信息。與傳統(tǒng)的Sanger測序法相比，它具有高效便捷的特點(diǎn)，可以以相對低廉的成本同時(shí)完成上萬個基因的測序。自2009年美國學(xué)者Ng等首次運(yùn)用全外顯子測序分析單基因孟德爾遺傳病以來，目前通過此方法已有數(shù)十個遺傳病的致病基因被發(fā)現(xiàn)。運(yùn)用全外顯子測序?qū)z傳性心臟病的研究多集中于心肌病，相繼發(fā)現(xiàn)了致心律失常性右

2、室心肌病致病基因DES、肥厚型心肌病致病基因MRPL44、MTO1、AGK、MRPL3、AARS2以及擴(kuò)張性心肌病致病基因BAG3、GATAD1，而有關(guān)心律失常的報(bào)道相對較少。本課題通過全外顯子測序研究了一個遺傳性心臟傳導(dǎo)疾病家系，旨在找出致病基因，為疾病發(fā)病機(jī)制的研究提供參考資料，同時(shí)也為將來產(chǎn)前診斷、遺傳咨詢以及基因診斷提供幫助。
　　目的:探查一個遺傳性心臟傳導(dǎo)疾病家系的致病基因。
　　方法:首先通過心電圖與詢問病史對

3、一個包含5代37人的大家系進(jìn)行心臟傳導(dǎo)疾病的篩查，并采集外周血樣以提取gDNA;接著選取其中的三名患者與一名正常人進(jìn)行全外顯子測序，并利用dbSNP數(shù)據(jù)庫、TGP數(shù)據(jù)庫、YH數(shù)據(jù)庫以及ESP數(shù)據(jù)庫對測序結(jié)果中的已知變異進(jìn)行篩查;再在去除已知變異后的結(jié)果中選出三名患者共有而正常人沒有的疑似突變;然后運(yùn)用Mutation Taster、SIFT以及Poly Phen-2對疑似突變進(jìn)行預(yù)測，選出致病性較高的候選突變;最后利用PCR擴(kuò)增以及Sa

4、nger測序法將候選突變在家系內(nèi)與家系外進(jìn)行驗(yàn)證，并在HGMD數(shù)據(jù)庫、Pubmed數(shù)據(jù)庫以及Google scholar上進(jìn)行查重。
　　結(jié)果:該家系遺傳性心臟傳導(dǎo)疾病呈現(xiàn)常染色體顯性遺傳特點(diǎn)，家系中存在10名患者。經(jīng)過全外顯子測序、公共數(shù)據(jù)庫篩查、疑似變異分析以及功能軟件預(yù)測后，留下12個候選突變。經(jīng)過家系內(nèi)與家系外驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)僅有SCN5A上的雜合變異c.4485 C＞A(p.Y1495X)與心臟傳導(dǎo)疾病發(fā)生共分離。該變異未被報(bào)道