血管生成抑制劑硝羥喹啉衍生物的設計、合成及藥理活性研究.pdf

1、文章主要從以下幾方面進行了論述。
　　第一部分硝羥喹啉衍生物的設計與合成。
　　目的：在前期研究的基礎上設計、合成新的硝羥喹啉衍生物。
　　方法：將8-羥基喹啉置于濃鹽酸和37％甲醛的體系中，持續(xù)通HCl氣體10h，得到5-氯甲基-8-羥基喹啉(a1)，然后和苯胺、吡啶胺等芳香胺反應得到一系列化合物。其中化合物B6和B7的合成過程不同，通過將5-氯甲基-8羥基喹啉改變成5-胺甲基-8羥基喹啉，然后和4-三氟甲基苯甲酰氯

2、、4-三氟甲基苯磺酰氯反應得到目標化合物B6和B7。純化后通過核磁共振波譜(nuclear magnetic resonance，NMR)掃描鑒定其結構，通過高效液相色譜(high-performance-liquid chromatography，HPLC)檢測其純度，控制純度＞95％。用于初步藥理研究的化合物A6并通過紅外光譜(infrared spectra，IR)掃描、紫外光譜掃描(utlraviolet，UV)，液相-串聯(lián)質譜

3、(liquid chromatograph-mass spectrometer，LC-MS)進一步鑒定化合物的結構，并通過高效液相色譜儀檢測化合物的純度，控制純度＞99％。
　　結果：合成化合物通過HPLC測試純度均大于95％，并通過NMR掃描鑒定結構的正確性。通過UV掃描、IR掃描、LC-MS測試進一步驗證化合物A6結構正確，并通過HPLC測試純度為99.05％。
　　結論：合成設計思路正確，合成的硝羥喹啉衍生物純度合格，

4、可以用于藥理活性初篩實驗。
　　第二部分硝羥喹啉衍生物的活性初篩及化合物A6的初步藥理活性研究。
　　目的：將合成的衍生物進行活性初篩，篩選出活性較好的化合物A6;在此基礎上，進一步對化合物A6進行初步的藥理活性研究。
　　方法：通過[3H]-thymidine摻入法實驗考察已合成硝羥喹啉衍生物對HUVEC增殖能力的影響，篩選活性較好化合物，并根據(jù)篩選結果選擇化合物A6進行初步的藥理活性研究。常規(guī)培養(yǎng)HUVEC細胞，采

5、用MTT實驗考察化合物A6對細胞活力的抑制作用。設定Control組(DMSO，20μmol/L)、Nitroxoline組(Nitroxoline5μmol/L)、低劑量組(2.5μmol/L)、中劑量組(5μmol/L)和高劑量組(10μmol/L)5個組別進行研究。給予處理培養(yǎng)24h后，光鏡下觀察化合物A6對HUVEC形態(tài)的影響;采用DAPI染色法觀察給予化合物A6后HUVEC細胞核的變化情況;Annexin V/PI雙染法考察化

6、合物A6誘導HUVEC凋亡的作用;Western blot法檢測HUVEC內caspase-3/cleaved caspase-3的蛋白表達情況;Brdu增殖試劑盒測試化合物A6對HUVEC增殖能力的影響。
　　結果：
　　1.[3H]-thymidine摻入法實驗進行活性初篩
　　[3H]-thymidine摻入法實驗篩選的第一批化合物中化合物A6活性較好，對HUVEC細胞24h的IC50值為1.70μmol/L;第

7、二批化合物中化合物B5、B9、B4、B10活性較好，其24 h的IC50值分別為0.679μmol/L、0.644μmol/L、1.03μmol/L、1.51μmol/L。
　　2.不同處理后，HUVEC細胞形態(tài)的變化
　　Control組單個細胞形態(tài)正常，輪廓清晰，多個細胞呈現(xiàn)“鋪路石”狀排列，中、高劑量組和Nitroxoline組細胞有部分變圓、浮起、細胞間接觸變松。
　　3.不同處理后，DAPI染色觀察HUVEC

8、細胞核的變化
　　Control組細胞核染色質均勻，核形完整;中、高劑量組和Nittoxoline細胞核內染色質出現(xiàn)不同程度的凝集，核形不完整，核內出現(xiàn)高亮的顆粒物質。
　　4.不同處理后，Annexin V/PI雙染法流式細胞術考察HUVEC凋亡情況
　　與Control組相比，中、高劑量組凋亡率明顯提高（P＜0.01）;與Nitroxoline組相比，高劑量組凋亡率明顯提高(P＜0.05)。
　　5.不同處理

9、后，Western blot法檢測HUVEC內caspase-3/cleaved caspase-3蛋白表達情況
　　與Control組相比，高劑量組caspase-3的蛋白表達量顯著降低(P＜0.05)，中、高劑量組cleaved caspase-3的蛋白表達量顯著升高(P＜0.05; P＜0.01)，且中、高劑量組與Nitroxoline組比較，cleaved caspase-3的蛋白表達含量顯著增高(P＜0.05;P＜0.0