重組辛德畢斯病毒的制備及其功能特性的研究.pdf

1、辛德畢斯(Sindbis virus，SINV)病毒隸屬于披膜病毒科(Togavirudea)甲病毒屬(Alphavirus)，感染人類可引發(fā)發(fā)熱、倦怠、頭痛、關節(jié)痛和皮疹等癥狀，被稱為“辛德畢斯綜合熱”。SINV在形態(tài)、結構、復制、翻譯及發(fā)病機理等方面均集中體現(xiàn)了動物病毒的特征，并且其為溫和型病原體，操作安全性高，目前已作為模型病毒被廣泛應用于動物病毒基本規(guī)律的研究。SINV在感染BHK、Vero等哺乳動物細胞的同時，也可以感染C6/

2、36等昆蟲細胞，但該病毒在活體動物的感染路徑和組織嗜性并不清楚，進一步探討其感染的分子機制有賴于可視化重組病毒的制備。腦內接種SINV可致3日齡乳鼠死亡，而高日齡小鼠在接種SINV后可自愈。近期研究表明，經(jīng)過傳代培養(yǎng)或定點突變后的篩選病毒可使高日齡小鼠死亡。但是SINV神經(jīng)毒力株特異性的分子機理還有待于進一步研究。
　　 XJ-160病毒是上世紀90年代從新疆采集的蚊蟲標本分離到的一株SIN病毒。本課題組多年來針對其開展了一系列

3、工作，包括全基因組序列測定和分析，感染性克隆構建等。為了進一步探討辛德畢斯病毒的組織嗜性，本研究擬以XJ-160病毒感染性克隆為分子基礎，通過融合PCR、體外轉錄和脂質體轉染等方法構建新型增強型綠色熒光蛋白(EGFP)報告基因標記的SINV，并利用標記病毒進行了細胞易感性研究。同時，為了探討決定SINV神經(jīng)毒力日齡依賴性的分子機制，本研究還將通過體外定點突變等方法對其E2基因上的關鍵毒力位點進行突變，并考察E2基因定點突變SINV的神經(jīng)

4、毒力特征。
　　 研究結果表明，利用XJ-160病毒反向遺傳學技術平臺，最終恢復獲得了EGFP標記的SINV和4株突變病毒?；謴筒《镜目瞻咝螒B(tài)和增殖趨勢均與親本病毒相似。利用標記病毒進行細胞嗜性研究，結果發(fā)現(xiàn)SINV對腎癌細胞具有特異性侵染能力，為腎癌治療帶來了新的契機，對于開發(fā)相應的腫瘤治療手段具有重要的指導意義。同時，乳鼠神經(jīng)毒力實驗結果提示，E2基因上關鍵位點突變改變了XJ-160病毒致小鼠死亡的日齡，SINV致小鼠死亡的