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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
通過(guò)鑒定Rock2磷酸化位點(diǎn)來(lái)研究其對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)活性的影響,并明確Rock2在肝癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用。
方法:
1.通過(guò)磷酸化位點(diǎn)預(yù)測(cè)軟件以及生物信息學(xué)分析Rock2結(jié)構(gòu),并設(shè)計(jì)可能發(fā)生磷酸化位點(diǎn)的磷酸化多肽。
2.分別對(duì)HepG2細(xì)胞和MHCC97H細(xì)胞進(jìn)行UV照射,通過(guò)Western Blot分析Rock2可能發(fā)生磷酸化的位點(diǎn)。
3.應(yīng)用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn),
2、觀察UV輻射誘導(dǎo)DNA損傷時(shí), Rock2磷酸化位點(diǎn)對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)活性的影響。
結(jié)果:
1. Rock2可能發(fā)生磷酸化的位點(diǎn)有:(1) S442;(2) S771;(3) T814。
2. UV照射后,Rock2的T814位點(diǎn)發(fā)生磷酸化。
3. UV照射后,MT-Rock2組的克隆形成率比WT-Rock2組低。
4. UV照射后,MT-Rock2組的細(xì)胞凋亡率比WT-Rock2組高。<
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