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文檔簡介
1、目的:
通過干擾RNA使肝癌細胞HepG2及SMCC-7721中ROCK2基因的表達下調,探討ROCK2對IFITM1的調控及對肝癌細胞增殖的影響。
方法:
1、選取HepG2、SMCC-7721、Huh7三株肝癌細胞及正常肝細胞HL7702,分別檢測其ROCK2的mRNA及蛋白表達。
2、將ROCK2的siRNA片段轉染進肝癌細胞株HepG2和SMCC-7721中,然后檢測ROCK2蛋白和mRN
2、A水平的變化。
3、將上述細胞分成:control,siRNA(-),ROCK2-siRNA三組,檢測IFITM1的蛋白表達和mRNA水平變化。
4、通過干擾ROCK2后用CCK8、EDU檢測細胞的增殖變化。
5、穩(wěn)定低表達ROCK2中干擾IFITM1后觀察肝癌細胞的增殖的變化。
結果:
1、ROCK2在肝癌細胞中mRNA及蛋白水平呈現(xiàn)相對高表達狀態(tài)。
2、將肝癌細胞內的ROC
3、K2基因下調后,其mRNA和蛋白的表達均下降。
3、Western blot及實時熒光定量PCR結果顯示ROCK2-siRNA組 IFITM1蛋白表達和mRNA明顯升高。
4、ROCK2-siRNA組肝癌細胞增值受到明顯抑制。
5、穩(wěn)定下調ROCK2的同時干擾IFITM1后肝癌細胞的增殖較單獨干擾ROCK2組有所恢復。
結論:
下調ROCK2基因表達后IFITM1表達水平明顯升高,使肝癌
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