急性腹瀉患者非傷寒沙門菌耐藥監(jiān)測(cè)和基因分型研究.pdf

1、目的：
　　檢測(cè)本地區(qū)非傷寒沙門氏菌(NTS)的血清型和抗生素耐藥情況，應(yīng)用脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)和多位點(diǎn)序列分析(MLST)，確定菌株的同源性和優(yōu)勢(shì)流行基因型以及菌株間遺傳進(jìn)化關(guān)系。為本地區(qū)NTS感染的追蹤溯源提供數(shù)據(jù)參考，為NTS感染的預(yù)防控制和治療提供幫助。
　　方法:
　　1、菌株血清學(xué)分型和藥敏試驗(yàn):試驗(yàn)菌株分離自天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院腸道門診急性腹瀉患者糞便標(biāo)本，收集時(shí)間為2012和2013的5-10月份

2、。血清型鑒定按照沙門氏菌血清診斷操作步驟（泰國(guó)S&A公司提供）進(jìn)行，根據(jù)測(cè)定得到的抗原式確定沙門氏菌的血清型。采用K-B紙片擴(kuò)散法檢測(cè)非傷寒沙門菌臨床株對(duì)17種抗菌藥物的耐藥性。
　　2、PFGE:提取非傷寒沙門菌菌株全基因組DNA，經(jīng)限制性內(nèi)切酶XbaⅠ酶切后進(jìn)行脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)分析，對(duì)于腸炎沙門氏菌再經(jīng)限制性內(nèi)切酶BlnⅠ酶切后進(jìn)行脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)分析。
　　3、MLST:分別擴(kuò)增菌株的7個(gè)管家基因(

3、thrA，pure, sucA，hisD, aroC, hemD,dnaN)的核心片段(510bp-894bp)，將測(cè)序結(jié)果提交至國(guó)際MLST數(shù)據(jù)庫(kù)網(wǎng)站(http://www.mlst.net)，獲得受試菌株的等位基因圖譜及其對(duì)應(yīng)的ST型(SequenceType, ST)。
　　結(jié)果:
　　1、共分離45株NTS，血清學(xué)分型包括5個(gè)血清群、12個(gè)血清型，均在A～F群范圍內(nèi)，優(yōu)勢(shì)血清群依次為D群和B群，以O(shè)∶4和O∶9為主。

4、血清型包括國(guó)內(nèi)常見(jiàn)的腸炎、鼠傷寒、阿貢納、山夫登堡、德爾卑、布倫登盧普血清型，國(guó)內(nèi)少見(jiàn)的姆班達(dá)卡、蒙得維的亞血清型，以及國(guó)內(nèi)罕見(jiàn)的庫(kù)卡、格蘭扁、菲爾摩雷和奧里塔曼林血清型。優(yōu)勢(shì)血清型為腸炎沙門氏菌和鼠傷寒沙門氏菌。
　　2、45株NTS對(duì)萘啶酸敏感率最低，其次是鏈霉素、慶大霉素、氨芐西林、四環(huán)素、哌拉西林、氯霉素。對(duì)左氧氟沙星、阿米卡星、阿莫西林/克拉維酸、頭孢他啶敏感率大于90％，對(duì)環(huán)丙沙星、頭孢曲松、頭孢噻肟、復(fù)方新諾明、氨曲

5、南和亞胺培南敏感率為100％。與萘啶酸敏感株相比，萘啶酸耐藥株對(duì)環(huán)丙沙星及左氧氟沙星敏感性下降。菌株全敏感率為24.44％，單藥耐藥率為44.44％，多重耐藥率達(dá)17.78％。腸炎血清型主要為單藥耐藥，而鼠傷寒血清型則以多重耐藥較常見(jiàn)，對(duì)氨芐西林、氯霉素、四環(huán)素、鏈霉素呈耐藥或中介。
　　3、PFGE產(chǎn)生23種PT型（圖譜型），條帶數(shù)為12到20之間，相似系數(shù)為0.56-1，分為4大聚類(A、B、C、D)，其中各聚類又包括不同的亞

6、聚類，優(yōu)勢(shì)聚類為A1和D1。有11種PT型別包括2株以上分離株，其中腸炎沙門菌PT2和鼠傷寒沙門氏菌PT18為優(yōu)勢(shì)PT型，PT2、PT6、PT20、PT22在2012和2013年均被分離出。6株P(guān)T2和4株P(guān)T18型分別分離自同一日期，6株P(guān)T2型腸炎沙門菌被證實(shí)為感染暴發(fā)。XbaⅠ分為同一型別的11株腸炎沙門菌經(jīng)BlnⅠ作用后可進(jìn)一步分為3個(gè)型別。用PFGE分型預(yù)測(cè)血清型，預(yù)測(cè)與實(shí)際血清型一致率占70.9％。
　　4、MLST將

7、45株試驗(yàn)菌株分為13個(gè)STs，其中14株腸炎血清型均為ST11，9株鼠傷寒血清型包括6株ST19和3株ST34，1株庫(kù)卡血清型和4株山夫登堡血清型均為ST14，4株阿貢納血清型均為ST13，3株布倫登盧普血清型為ST22，3株德爾卑血清型為1株ST40和2株ST71，2株蒙得維的亞為ST26，2株菲爾摩雷血清型為ST46，1株格蘭扁為ST358，1株姆班達(dá)卡為ST413，1株奧里塔曼林為ST1516。ST11所占比例最多，其次為ST3

8、4。序列型之間遺傳關(guān)系較遠(yuǎn)，其中德爾卑血清型包括的序列型ST40和ST71遺傳學(xué)上不相關(guān)，而遺傳相關(guān)的ST14同時(shí)包括了山夫登堡血清型和庫(kù)卡血清型。
　　結(jié)論:
　　1、本地NTS血清型呈現(xiàn)多樣性，腸炎血清型和鼠傷寒血清型為主要血清型，檢測(cè)出一些國(guó)內(nèi)少見(jiàn)（姆班達(dá)卡、蒙得維的亞）和罕見(jiàn)（格蘭扁、菲爾摩雷和奧里塔曼林）血清型。
　　2、本組資料顯示NTS對(duì)三代頭孢耐藥菌株罕見(jiàn)，但對(duì)萘啶酸耐藥率較高且多伴有氟喹諾酮(FQs)

9、敏感性降低，對(duì)FQs臨床經(jīng)驗(yàn)用藥構(gòu)成威脅。鼠傷寒沙門菌多為MDR，呈現(xiàn)ACST耐藥表型。
　　3、PFGE顯示PT2和PT18為優(yōu)勢(shì)型別。PT2、PT6、PT20、PT22克隆株跨年度存在，其中PT2型別有跨年度流行現(xiàn)象。有11組相同克隆株的出現(xiàn)，證實(shí)了1起腸炎沙門菌感染暴發(fā)，發(fā)現(xiàn)1起疑似鼠傷寒沙門菌感染暴發(fā)。對(duì)腸炎沙門菌進(jìn)行XbaⅠ-BlnⅠ雙酶切PFGE可提高分辨能力。PFGE分型對(duì)血清學(xué)分型有預(yù)測(cè)價(jià)值。
　　4、MLS