CHAT及nNOS基因在先天性膽總管囊腫壁中的分布及意義.pdf

1、目的:
　　 先天性膽總管囊腫(Congenitalcholedochalcyst，CCC)，是小兒時(shí)期常見(jiàn)的一種先天性膽道發(fā)育異常，表現(xiàn)為肝外膽道遠(yuǎn)端狹窄及管壁發(fā)育不良或存在膽胰管合流異常，使膽汁淤積，排出障礙導(dǎo)致膽總管擴(kuò)張。先天性膽總管囊腫在嬰幼兒期發(fā)病者中占2/3，其他1/3見(jiàn)于青年，男女比例為1∶4～5[1]。截至目前，先天性膽總管囊腫的病因仍不十分明確，近年來(lái)隨著對(duì)本病形態(tài)學(xué)、膽汁酶學(xué)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等研究的進(jìn)展，認(rèn)為CCC

2、是由多種因素造成的先天發(fā)育異常，而膽總管遠(yuǎn)端神經(jīng)、肌肉發(fā)育不良的發(fā)病因素越來(lái)越受到人們的重視。膽道的神經(jīng)分布包括膽道壁內(nèi)的內(nèi)在神經(jīng)和外來(lái)神經(jīng)系統(tǒng)兩部分，二者相互協(xié)調(diào)，共同調(diào)節(jié)膽道的功能。研究表明調(diào)節(jié)膽道的神經(jīng)遞質(zhì)主要有興奮性遞質(zhì)Ach和抑制性遞質(zhì)NO，但CCC病變囊腫中不同神經(jīng)遞質(zhì)的分布及其與不同囊腫類型的關(guān)系仍不十分清楚。故本研究通過(guò)利用RT-PCR的方法檢測(cè)對(duì)比CCC患兒肝外膽道不同部位間神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中合成抑制性神經(jīng)遞質(zhì)NO的關(guān)鍵酶

3、-一氧化氮合酶(NeuronalNitricOxideSynthase，nNOS)和興奮性遞質(zhì)Ach的關(guān)鍵酶-膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(Cholineacetyltransferas，CHAT)的表達(dá)情況，從基因水平和神經(jīng)動(dòng)力角度分析腸神經(jīng)調(diào)控異常在CCC發(fā)病機(jī)制中的作用，從而進(jìn)一步完善CCC的發(fā)病機(jī)理，為其臨床治療提供重要的理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 隨機(jī)選取2011年1月～2012年9月河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院小兒外手術(shù)治療的

4、先天性膽總管囊腫患兒20例作為研究對(duì)象，男6例，女14例，男∶女=1∶2.3;年齡8月～11歲，平均年齡4.33±2.94歲，其中以腹痛就診患兒12例，以黃染便白就診患兒4例，以發(fā)熱就診患兒2例，膽道穿孔的患兒1例，產(chǎn)前B超檢查發(fā)現(xiàn)1例，所有患兒術(shù)前經(jīng)過(guò)B超或CT檢查后明確診斷，手術(shù)切去膽總管囊腫及膽囊，行肝管空腸Roux(-)en-Y吻合術(shù)或肝管十二指腸吻合術(shù)，分別切取膽總管囊腫遠(yuǎn)、近端管壁和膽囊壁作為遠(yuǎn)端組、近端組和膽囊組，將三組標(biāo)

5、本液氮速凍后置于-70℃冰箱中保存。用熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)各組標(biāo)本中nNOSmRNA和CHATmRNA轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)情況，所得數(shù)據(jù)輸入SPSS13.0forWindows軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，P＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 通過(guò)RT-PCR檢測(cè)先天性膽總管囊腫不同部位CHAT和nNOS基因的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)上述指標(biāo)在各組中有不同表達(dá)。CHAT和nNOS基因在先天性膽總管囊腫的近端組表達(dá)分別為1.38

6、±0.21，1.65±0.16;在遠(yuǎn)端組表達(dá)分別為1.79±0.21，1.15±0.17;在膽囊組的表達(dá)分別為1.30±0.19，1.57±0.12;在囊狀擴(kuò)張型CCC遠(yuǎn)端管壁中的表達(dá)為1.74±0.21，1.11±0.15;在梭狀擴(kuò)張型CCC遠(yuǎn)端管壁中的表達(dá)為1.86±0.20，1.22±0.18。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)CHAT基因在先天性膽總管囊腫的近端組、膽囊組的表達(dá)均少于囊腫遠(yuǎn)端組表達(dá)(P＜0.05)，有顯著性差異;而CHAT基因在近端

7、組和膽囊組之間沒(méi)有顯著性差異(P＞0.05)。nNOS基因在先天性膽總管囊腫近端組、膽囊組表達(dá)均多于遠(yuǎn)端組(P＜0.05)，有顯著性差異;而在近端組和膽囊組之間沒(méi)有顯著性差異(P＞0.05)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CHAT基因和nNOS基因在囊狀擴(kuò)張型CCC遠(yuǎn)端組和梭形擴(kuò)張型CCC遠(yuǎn)端組中表達(dá)量之間比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、CHAT基因表達(dá)在CCC遠(yuǎn)端表達(dá)多于囊腫的近端和膽囊，說(shuō)明興奮性膽堿能神

8、經(jīng)在先天性膽總管囊腫的遠(yuǎn)端分布相對(duì)增多，導(dǎo)致遠(yuǎn)端膽管環(huán)形平滑肌痙攣性收縮，導(dǎo)致CCC發(fā)病。
　　 2、nNOS基因表達(dá)在CCC遠(yuǎn)端表達(dá)少于近端和膽囊，說(shuō)明抑制性神經(jīng)在膽總管囊腫遠(yuǎn)端分布減少，膽管遠(yuǎn)端平滑肌舒張受限，導(dǎo)致膽總管囊腫的形成。
　　 3、CHAT、nNOS基因在近端組和膽囊組表達(dá)無(wú)明顯差異，說(shuō)明腸神經(jīng)動(dòng)力調(diào)控異?？赡芤阅懣偣苣夷[的遠(yuǎn)端病變?yōu)橹鳌?br>　　 4、興奮性和抑制性神經(jīng)遞質(zhì)的分布異常在不同病理類型C