黃芪多糖和牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液預先給藥對孕鼠鞘內注入布比卡因脊神經毒性的影響.pdf

1、近年來,國內外產科病人應用椎管內麻醉進行剖宮產手術麻醉、分娩鎮(zhèn)痛和術后止痛的比率逐年增加,但是臨床工作中發(fā)現(xiàn),部分產婦應用椎管內麻醉后發(fā)生神經系統(tǒng)并發(fā)癥。麻醉藥阻滯效能敏感性和神經毒性的研究存在很大爭議。綜合文獻報道,神經電生理學方面研究認為妊娠與分娩增加局部麻醉藥的中樞、中軸、周圍神經的阻滯效能敏感性和神經毒性作用, 因而減少對此類藥物的需要量。
　　 產婦不同于一般病人,對多數產婦而言,妊娠分娩是正常的生理過程,減少和避免產

2、后并發(fā)癥、尤其是神經系統(tǒng)并發(fā)癥的發(fā)生,對提高產婦產后生活質量,顯得尤為重要。目前關于局部麻醉藥神經毒性損傷防治的研究尚未取得確切效果。黃芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)是中藥黃芪的主要有效成分之一,其不但具有清除自由基、抵抗脂質過氧化反應,有效減輕神經細胞的凋亡的作用,而且還可以通過激活細胞免疫,升高IL-1β水平而促進脊神經損傷后的修復,對脊神經再生有一定作用。黃芪多糖能否減輕布比卡因的脊神經毒性

3、損傷反應目前暫未見研究報道。
　　 本研究通過制備孕鼠鞘內注入布比卡因的模型,探討妊娠分娩期間局部麻醉藥阻滯效能敏感性和神經毒性是否改變,鞘內注入布比卡因導致神經細胞凋亡的信號轉導通路,以及黃芪多糖和牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液預先給藥對布比卡因脊神經毒性的保護作用,為藥物防治妊娠分娩期間局部麻醉藥神經毒性損傷提供一定實驗依據。
　　 第一部分：鞘內注入布比卡因對孕鼠神經功能及背根神經節(jié)細胞caspase-8和caspa

4、se-9基因的影響
　　 目的：比較孕鼠和非孕鼠鞘內注入布比卡因對神經功能及背根神經節(jié)細胞caspase-9和caspase-8基因表達的影響,探討妊娠分娩期間脊神經對布比卡因的阻滯效能敏感性是否改變及其機制。
　　 方法：健康妊娠17日及非孕雌性SD大鼠,取鞘內置管成功的兩種鼠各18只,孕鼠體重350～400g,非孕鼠體重200～220g,完全隨機方法分成6組(n=6)。孕鼠對照組(PN組)與2％布比卡因孕鼠組(P2B

5、組)及4％布比卡因孕鼠組(P4B組)；非孕鼠對照組(N組)與2％布比卡因非孕鼠組(2B組)及4％布比卡因非孕鼠組(4B組)。PN與N組:鞘內注射生理鹽水30μl,其余4組相應鞘內分別注入2％或4％布比卡因30μl。鞘內注藥后10min、20min、30min、1h、2h、4h、1d、2d、3d和4d測定甩尾反應潛伏期TFL,用最大效應百分比MPE表示,并進行下肢運動功能MF評分。4d后各組大鼠行斷頸處死,分離背根神經節(jié),Western

6、blot分析caspase-8和caspase-9蛋白表達水平以及RT-PCR檢測caspase-8和caspase-9mRNA的表達。
　　 采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件進行分析,計量資料以均數±標準差((x)±s)表示,置管前后TFL組間比較采用單因素方差分析,置管前后的比較采用配對,檢驗。MPE值比較采用重復測量設計的方差分析。caspase-8,9蛋白和mRNA表達比較采用單因素方差分析,多重比較采用Bonferron

7、i法(方差齊)或DunnettT3法(方差不齊)。運動功能評分以中位數(第10,90位點百分位數)表示,多組比較采用Kruskal-Wallis檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結論：妊娠期間孕鼠背根神經節(jié)細胞對布比卡因的阻滯效能敏感性增大。鞘內注入相同濃度和劑量布比卡因,孕鼠感覺、運動神經阻滯持續(xù)時間明顯長于非孕鼠。布比卡因是通過線粒體通路活化caspase-9基因誘導大鼠背根神經節(jié)細胞發(fā)生凋亡。
　　 第

8、二部分：多次鞘內注入布比卡因對孕鼠神經功能及背根神經節(jié)細胞凋亡的影響
　　 目的：比較孕鼠和非孕鼠多次鞘內注入布比卡因對神經功能及背根神經節(jié)細胞凋亡的影響,探討妊娠分娩期間布比卡因脊神經毒性是否改變及其機制。
　　 方法：健康妊娠17日及非孕雌性SD大鼠,取鞘內置管成功的兩種鼠各12只,孕鼠體重350～400g,非孕鼠體重200～220g,完全隨機方法分成4組(n=6)。孕鼠2％布比卡因組(P2B組)和非孕鼠2％布比卡因

9、組(2B組)鞘內分別注入2％布比卡因30μl,20μl和10μl,共3次,每次間隔1h；孕鼠對照組(PN組)和非孕鼠對照組(N組)鞘內分別注入相同體積的生理鹽水。在第3次鞘內注藥后1d、2d、3d、4d和5d測定TFL,用最大效應百分比MPE表示,并進行下肢運動功能MF評分。5d后多聚甲醛灌注,分離背根神經節(jié),進行病理組織學觀察,TUNEL法檢測背根神經節(jié)細胞凋亡情況以及免疫組織化學法檢測caspase-9蛋白表達。
　　 采用

10、SPSSl3.0統(tǒng)計學軟件進行分析,計量資料以均數±標準差((x)±s)表示,置管前后TFL組間比較采用單因素方差分析,置管前后比較采用配對t檢驗。MPE值比較采用重復測量設計的方差分析。凋亡細胞計數和caspase-8,9陽性細胞計數比較采用單因素方差分析,多重比較采用Bonferroni法(方差齊)或Dunnett T3法(方差不齊)。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結論：妊娠分娩期間布比卡因對大鼠背根神經節(jié)細胞的毒

11、性增大,多次鞘內注入相同濃度和劑量布比卡因后,孕鼠出現(xiàn)明顯的感覺功能障礙和神經細胞損害,而運動功能未受影響,其背根神經節(jié)細胞凋亡與caspase-9基因大量活化密切相關。
　　 第三部分：黃芪多糖預先給藥對孕鼠鞘內注入布比卡因脊神經毒性的影響
　　 目的：探討黃芪多糖預先給藥是否可以減輕孕鼠鞘內注入布比卡因的脊神經毒性及其機制。
　　 方法：取鞘內置管成功健康妊娠17日孕鼠30只,完全隨機方法分成5組(n=6)。

12、對照組(N組),2％布比卡因單次給藥組(2B組),2％布比卡因單次給藥黃芪多糖預處理組(2H組),2％布比卡因多次給藥組(R2B組),2％布比卡因多次給藥黃芪多糖預處理組(R2H組)。N組:鞘內注射生理鹽水30μl,腹腔注入生理鹽水2ml。2B組:鞘內注入2％布比卡因30μl,腹腔注入生理鹽水2ml。R2B組:鞘內分別注入2％布比卡因30μl,20μl和10μl,共3次,每次間1h,腹腔注入生理鹽水2ml。2H組:鞘內注入2％布比卡因3

13、0μl,腹腔注入黃芪多糖2ml。R2H組:鞘內分別注入2％布比卡因30μl,20μl和10μl,共3次,每次間隔1h,腹腔注入黃芪多糖2ml。黃芪多糖給藥方法為:25mg/kg,生理鹽水稀釋成2ml,于鞘內給藥前連續(xù)注藥3天,鞘內給藥后連續(xù)注藥4天。在第3次鞘內注藥后1d、2d、3d、4d和5d測定TFL,用最大效應百分比MPE表示,并進行下肢運動功能MF評分。5d后多聚甲醛灌注,分離背根神經節(jié),進行病理組織學觀察,TUNEL法檢測背根

14、神經節(jié)細胞凋亡情況以及免疫組織化學法檢測caspase-9蛋白表達。
　　 采用SPSSl3.0統(tǒng)計學軟件進行分析,計量資料以均數±標準差(x±s)表示,置管前后TFL組間比較采用單因素方差分析,置管前后比較采用配對t檢驗。MPE值比較采用重復測量設計的方差分析。凋亡細胞計數和caspase-9陽性細胞計數比較采用單因素方差分析,多重比較采用Bonferroni法(方差齊)或DunnettT3法(方差不齊)。P<0.05為差異有

15、統(tǒng)計學意義。
　　 結論：預先給予黃芪多糖可以減輕孕鼠鞘內注入布比卡因的脊神經毒性,其機制可能與抑制caspase-9蛋白表達,抗神經細胞凋亡有關。
　　 第四部分：牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液預先給藥對孕鼠鞘內注入布比卡因脊神經毒性的影響
　　 目的：探討牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液預先給藥是否可以減輕孕鼠鞘內注入布比卡因的脊神經毒性及其機制。
　　 方法：取鞘內置管成功孕鼠18只,完全隨機方法分成3組

16、(n=6)。對照組(N組),2％布比卡因多次給藥組(R2B組),2％布比卡因多次給藥AGC預處理組(R2A組)。N組:鞘內注射生理鹽水30μl,20μl和10μl,共3次,每次間隔1h,腹腔注入生理鹽水。R2B組:鞘內分別注入2％布比卡因30μl,20μl和10μl,共3次,每次間隔1h,腹腔注入生理鹽水。R2A組:鞘內分別注入2％布比卡因30μl,20μl和10μl,共3次,每次間隔1h,腹腔注入AGC。各組鞘內注藥完畢后,用10μl

17、生理鹽水沖洗導管。AGC給藥方法為:AGC稀釋液(10u/ml),按100u/kg,于鞘內給藥前連續(xù)灃藥3天,鞘內給藥后連續(xù)注藥4天。其余組腹腔注入等體積生理鹽水(10ml/kg)。在第3次鞘內注藥后1d、2d、3d、4d和5d測定TFL,用最大效應百分比MPE表示,并進行下肢運動功能MF評分。5d后多聚甲醛灌注,分離背根神經節(jié),進行病理組織學觀察,TUNEL法檢測背根神經節(jié)細胞凋亡情況以及免疫組織化學法檢測caspase-9蛋白表達。

18、
　　 采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件進行分析,計量資料以均數±標準差(x±s)表示,置管前后TFL組間比較采用單因素方差分析,置管前后比較采用配對t檢驗。MPE值比較采用重復測量設計的方差分析。凋亡細胞計數和caspase-9陽性細胞計數比較采用單因素方差分析,多重比較采用Bonferroni法(方差齊)或DunnettT3法(方差不齊)。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結論：預先給予牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射