茶多酚,厚樸酚抑制早期人工根面齲作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、人口老齡化已經(jīng)成為當(dāng)今社會(huì)關(guān)注的重要問(wèn)題,隨之而來(lái)的則主要是老年人的健康問(wèn)題,由于牙體磨耗,牙齦萎縮導(dǎo)致的牙根暴露,口腔環(huán)境改變,衛(wèi)生狀況不佳等一系列因素的作用,使得老年人根面齲的發(fā)生率大大增加。雖然抗生素、氟化物等藥物在防齲方面取得了一定的效果,但其毒副作用卻也不可忽視,因此開(kāi)發(fā)新的防齲藥物一直是國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究重點(diǎn)。茶多酚為茶葉中的抑菌活性成分,約占茶葉干重的25％,是一種高效低毒的自由基清除劑和抗氧化劑,不僅可以提高人體免疫力,延

2、緩衰老,降低血壓血脂,而且對(duì)變形鏈球菌的生長(zhǎng)有很強(qiáng)的抑制作用。厚樸酚為厚樸的主要抑菌活性成分,不僅對(duì)心腦血管有保護(hù)作用而且有明顯的抗真菌和抑制口腔致病菌的作用。這兩種中藥是近年來(lái)研究較多的天然抗菌藥物,但其是否能有效的抑制根面齲的發(fā)生發(fā)展,以及它們與其他種類藥物療效的對(duì)比研究在國(guó)內(nèi)外研究還報(bào)道較少。
　　 目的:
　　 本文通過(guò)對(duì)比茶多酚、厚樸酚對(duì)早期人工根面齲的抑制作用,探討其防齲機(jī)制,為天然抗菌藥物在臨床的應(yīng)用與選擇

3、提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和依據(jù)。
　　 方法:
　　 1預(yù)備離體牙
　　 收集60歲以上因牙周病松動(dòng)Ⅲ°拔除的新鮮上頜磨牙40顆(體式顯微鏡下放大10倍觀察,根面無(wú)齲壞,無(wú)裂痕),刮除牙周膜和牙石,去離子水超聲蕩洗5min后于釉牙骨質(zhì)界處去除牙冠與牙髓組織,在腭側(cè)根面形成4×4×2mm3的牙骨質(zhì)塊,除根面(實(shí)驗(yàn)區(qū))外其余部分涂布雙層耐酸指甲油保護(hù),將制備好的牙骨質(zhì)塊浸于10％的甲醛溶液中消毒備用。
　　 2菌液的制備

4、
　　 將復(fù)蘇48h的變形鏈球菌(國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)菌株)于腦心浸液培養(yǎng)基(BHI)厭氧條件下[f(N2)=85％,Φ(CO2)=10％,Φ(H2)=5％]培養(yǎng),傳代三次后涂片,生化鑒定確定為變形鏈球菌后使用紫外分光光度計(jì),用無(wú)菌生理鹽水將菌液調(diào)整為OD=1.0的懸濁液備用。
　　 3建立人工根面齲模型
　　 將消毒好的牙骨質(zhì)標(biāo)本置于人工唾液中37℃,24h,使之形成獲得性膜后再放于制備好的新鮮菌液中,每48h更換菌液20

5、d后隨機(jī)抽取牙體組織標(biāo)本觀察確定是否形成早期齲損。
　　 4藥物處理早期人工齲
　　 將形成早期齲損的牙體組織標(biāo)本隨機(jī)分到四組:2mg/ml茶多酚溶液組,6.3μg/ml厚樸酚溶液組,20mg/ml氟化鈉溶液組和去離子水組,每組8顆標(biāo)本。將牙體組織標(biāo)本分別置于上述四種藥液中處理,每天浸泡3次每次時(shí)間為5min,循環(huán)5d,其余時(shí)間均置于37℃人工唾液恒溫箱中。
　　 5鈣離子溶出量測(cè)定:
　　 將四組藥物分

6、別處理后的牙骨質(zhì)標(biāo)本再次放入新鮮菌液中48h,于4h,8h,12h,24h,48h五個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別取兩毫升菌液用紫外分光光度計(jì)計(jì)算溶液中的鈣離子濃度。
　　 6掃描電子顯微鏡觀察
　　 將菌液中取出的牙骨質(zhì)塊經(jīng)0.1％PBS緩沖液漂洗三次后立即放入2.5％的戊二醛內(nèi)固定24h,1％鋨酸固定2h,再次放入0.1％PBS緩沖液漂洗三次,50％至無(wú)水乙醇逐級(jí)脫水干燥后鍍金膜,用掃描電鏡觀察開(kāi)窗區(qū)的牙體組織表面結(jié)構(gòu)并拍照。

7、　　 7統(tǒng)計(jì)處理
　　 將不同菌液中的鈣離子溶出量使用SPSS13.0軟件進(jìn)行方差分析,組間比較用snk-q檢驗(yàn),顯著性標(biāo)準(zhǔn)a=0.05。
　　 結(jié)果:
　　 1鈣離子溶出量測(cè)定結(jié)果
　　 1.1四組菌液中的鈣離子溶出量均在脫礦8小時(shí)后均隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增多。
　　 1.2在五個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn):0-8h:各組鈣離子溶出量無(wú)明顯差異,8-48:茶多酚組,氟化鈉組,厚樸酚組三組菌液中的鈣離子溶出量均較

8、去離子水組顯著減少(P＜0.05),兩兩比較后得出茶多酚組和氟化鈉組抑齲效果無(wú)明顯差別(p＞0.05),厚樸酚抑齲效果較差(p＜0.05)。
　　 2掃描電鏡觀察空白對(duì)照組:可見(jiàn)牙體表面粘附大量的細(xì)菌,牙體組織脫礦后形成大小不等的孔隙,陷窩;陷窩內(nèi)可見(jiàn)聚集的細(xì)菌團(tuán)塊。
　　 氟化鈉組:牙體組織表面細(xì)菌較對(duì)照組明顯減少,仍可看見(jiàn)牙骨質(zhì)表面板層結(jié)構(gòu),有些牙體組織破壞形成的陷窩表面可以看見(jiàn)礦物質(zhì)的再沉積。
　　 茶多酚

9、組:牙體組織結(jié)構(gòu)比較完整,裂隙周圍可見(jiàn)散在的細(xì)菌。
　　 厚樸酚組:牙體表面細(xì)菌較對(duì)照組減少,牙體組織結(jié)構(gòu)破壞比較明顯,牙體表面結(jié)構(gòu)紊亂,牙骨質(zhì)小管結(jié)構(gòu)呈斑塊孔隙和裂隙。
　　 結(jié)論:
　　 1牙體組織隨著放入菌液后時(shí)間的延長(zhǎng),鈣離子溶出量增多。
　　 2茶多酚,厚樸酚均可以在一定程度上抑制早期根面齲的發(fā)展,但是茶多酚抑制根面齲的作用效果較好。
　　 3藥物處理后的牙體組織表面結(jié)構(gòu)與對(duì)照組存在差異