應(yīng)用合成致死原理篩選胰腺癌對化療藥物反應(yīng)的關(guān)鍵基因.pdf

1、目的：本研究的目的在于應(yīng)用全基因組范圍內(nèi)合成致死篩選的方法，尋找胰腺癌對化療藥物耐藥中的關(guān)鍵基因，以期為胰腺癌的診斷和治療提供新的生物標(biāo)記物、治療靶點(diǎn)和聯(lián)合治療方案。
　　 方法：通過分子克隆的途徑構(gòu)建以piggy Bac轉(zhuǎn)座子為基礎(chǔ)的全基因組搜尋載體；確定人胰腺癌細(xì)胞系(Panc-1)的特性；通過DNA轉(zhuǎn)染和以熒光素酶為基礎(chǔ)的報(bào)告基因檢測建立并篩選含有穩(wěn)定四環(huán)素介導(dǎo)的基因調(diào)控系統(tǒng)的Panc-1細(xì)胞株；利用大規(guī)模電穿孔轉(zhuǎn)染和pi

2、ggyBac介導(dǎo)的基因重組建立Panc-1細(xì)胞株的全基因組范圍那突變文庫；并進(jìn)一步進(jìn)行了與吉西他濱合成致死的預(yù)篩選。
　　 結(jié)果：成功構(gòu)建了以piggyBac轉(zhuǎn)座子為基礎(chǔ)的基因搜尋載體；篩選得到了2個(gè)具有穩(wěn)定四環(huán)素基因表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)的Panc-1細(xì)胞株，即Panc-1-9.3和Panc-1-1781細(xì)胞株；成功建立了Panc-1細(xì)胞全基因組范圍內(nèi)的隨機(jī)基因突變文庫，進(jìn)一步將進(jìn)行吉西他濱合成致死的篩選。
　　 結(jié)論：成功構(gòu)建