esRAGE基因修飾OECs移植對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變的治療作用.pdf

1、背景及目的介紹:
　　糖尿病視網(wǎng)膜病變(Diabetic retinopathy,DR)是糖尿病并發(fā)的主要微血管病變之一,已經(jīng)成為全球成人致盲四大主因之一。而目前針對(duì)DR的治療有藥物、激光及抗VEGF治療等,這種治療只能起到防止病變繼續(xù)惡化的作用,因此尋找DR的根治方法成為世界性的難題。DR是視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的一類疾病,因此治療DR修復(fù)微血管成為關(guān)鍵。近年發(fā)現(xiàn)外生型內(nèi)皮祖細(xì)胞(Outgrowth endothelial c

2、ells,OECs)在微血管疾病中起到修復(fù)作用。AGEs-RAGE系統(tǒng)在糖尿病微血管病變中的重要作用已經(jīng)得到明確,而內(nèi)源分泌型RAGE(endogenous secretory RAGE,esRAGE)作為RAGE中一種新型剪接異構(gòu)體,能阻斷AGEs介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。
　　本文旨在探索esRAGE基因修飾OECs干預(yù)DR大鼠的治療作用,觀察該細(xì)胞對(duì)DR大鼠視網(wǎng)膜的影響以及對(duì)視網(wǎng)膜組織VEGF與TGF-β的表達(dá)的影響。
　　方法

3、:
　　健康雄性SD大鼠50只,按照隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分成4組,正常組8只,其余按1％鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射誘導(dǎo)造成DM模型(55mg/kg),正常對(duì)照組注射同等體積的檸檬酸緩沖液,飼養(yǎng)3個(gè)月后成DR模型,飼養(yǎng)過程中,死亡9只,再隨機(jī)分為每組10只。通過眼底造影觀察3個(gè)月、6個(gè)月DR的病變情況后,再進(jìn)行分組,各組分別為正常對(duì)照組(CON),糖尿病視網(wǎng)膜病變組(DR),注射OECs組(OECs),注射esRAGE-OECs組(es

4、RAGE-OECs),通過玻璃體注射等量體積等數(shù)量細(xì)胞溶液,于4周后行眼底造影觀察眼底病變情況;麻醉、心臟灌注后摘取眼球,HE染色觀察各組大鼠視網(wǎng)膜各層細(xì)胞病理改變;免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測VEGF和TGF-β在大鼠視網(wǎng)膜的表達(dá)情況等;
　　結(jié)果:
　　(1)3、6個(gè)月DR大鼠均現(xiàn)不同程度的視網(wǎng)膜眼底病變,前者出現(xiàn)明顯滲漏,后者更加嚴(yán)重;(2)組織病理學(xué)提示:CON組:視網(wǎng)膜各層次結(jié)構(gòu)規(guī)則整齊,形態(tài)正常;DR組:視網(wǎng)膜各層出現(xiàn)不

5、同程度水腫,節(jié)細(xì)胞層微血管擴(kuò)張充血,神經(jīng)纖維層間距增大,垂直纖維斷裂,內(nèi)、外核層細(xì)胞結(jié)構(gòu)疏松、排列紊亂,胞核增大,內(nèi)核層相對(duì)較薄,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層可見明顯新生血管;注射OECs組:內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層水腫有減輕,內(nèi)、外核層細(xì)胞排列較緊湊,仍然可見較多擴(kuò)張血管;esRAGE-OECs組:視網(wǎng)膜組織水腫減輕,各層細(xì)胞較清晰規(guī)整,擴(kuò)張血管有明顯減少,并且周圍有內(nèi)皮細(xì)胞環(huán)繞;(3)免疫組織化學(xué)檢測提示:與CON組比較,DR組、OECs組、