SPCA1在全腦缺血再灌注SD大鼠腦組織中的表達(dá)變化及與鈣超載的關(guān)系研究.pdf

1、目的：
　　 分析SPCA1在全腦缺血-再灌注SD大鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞中的表達(dá)，并探討其與腦組織缺血再灌注過程中胞內(nèi)Ca2+濃度的可能關(guān)系。
　　 方法：
　　 通過阻塞大鼠四血管（雙側(cè)椎動(dòng)脈，雙側(cè)頸總動(dòng)脈）建立SD大鼠的全腦缺血-再灌注模型;將120只（均為雄性、體重為200±20g）大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組，假手術(shù)組，缺血組和再灌注組（再灌注3小時(shí)、6小時(shí)、24小時(shí)、3天、7天）。隨后按缺血-再灌注不同時(shí)間點(diǎn)分別

2、處死動(dòng)物，快速取腦組織制成標(biāo)本。采用蘇木精-伊紅(H-E)和尼氏(Nissl)染色方法觀察神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)和數(shù)目的變化;采用免疫熒光抗體標(biāo)記法鑒定SPCA1在皮層神經(jīng)細(xì)胞中定位與表達(dá)強(qiáng)度，并采用Western Blot分析來予以補(bǔ)充驗(yàn)證;采用Fura-2負(fù)載的熒光分光光度法對(duì)勻漿后神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)與分離高爾基膜泡內(nèi)Ca2+濃度進(jìn)行測(cè)定。全部數(shù)據(jù)用SPSS15.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.全腦組織的H-E染色和海馬區(qū)神

3、經(jīng)細(xì)胞的尼氏染色結(jié)果顯示全腦缺血-再灌注導(dǎo)致腦組織大面積受損，皮層和海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量明顯減少,胞體腫脹且形態(tài)由多角形轉(zhuǎn)變?yōu)榻蛐危?在再灌注后期，尤其是缺血再灌注7天后，皮層神經(jīng)細(xì)胞周圍形成空泡，海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞分離脫失。
　　 2.SPCA1的熒光免疫定位和Western Blot的結(jié)果顯示全腦缺血再灌注后SD大鼠腦組織各部分的神經(jīng)細(xì)胞中SPCA1的表達(dá)水平呈現(xiàn)“低-高-低”的趨勢(shì)，即缺血和再灌注3h的SPCA1水平偏低，而在

4、再灌注6h迅速達(dá)到最高，而后緩緩下降至比正常水平低。
　　 3.Fura-2負(fù)載熒光分光光度法測(cè)定神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)和分離高爾基膜泡內(nèi)Ca2+濃度的結(jié)果顯示胞內(nèi)Ca2+濃度在缺血時(shí)即開始迅速升高，再灌注3h后即達(dá)到最高值，而后略有下降但仍然維持高于正常2倍以上的高濃度;分離高爾基體膜泡的Ca2+濃度則與胞內(nèi)Ca2+濃度變化趨勢(shì)相反，在缺血和再灌注早期濃度低，而再灌注24h后則處于高水平。
　　 結(jié)論：
　　 1.腦組織神