Hsa-mir-129抑制人腎癌SN12-PM6細(xì)胞相關(guān)分子機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：在前期細(xì)胞及動物水平相關(guān)研究基礎(chǔ)上，初步探討Has-mir-129抑制人腎癌SN12-PM6細(xì)胞的分子機(jī)制。
　　 方法：應(yīng)用lipofectamine2000MT將Has-mir-129(GFP)及空白質(zhì)粒載體(GFP)分別轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞及SN12-PM6細(xì)胞。轉(zhuǎn)染24—48小時后，熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率。噻唑藍(lán)(MTT)法測定SN12-PM6細(xì)胞的增值抑制率。流式細(xì)胞儀檢測293T細(xì)胞及SN12-PM6細(xì)胞的細(xì)胞

2、周期。分析細(xì)胞周期結(jié)果，進(jìn)而設(shè)計(jì)引物，RT-PCR測定基因Rb1、P21、P53及Cyclin D1表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果Has-mir-129(GFP)對293T細(xì)胞增值及相關(guān)基因的表達(dá)無顯著影響。但瞬時轉(zhuǎn)染至SN12-PM6細(xì)胞后96h細(xì)胞抑制率36％，對照轉(zhuǎn)染空載體為8％。流式測定SN12-PM6細(xì)胞周期明顯阻滯在G1-S期。RT-PCR測定Rb1、P21及P53基因表達(dá)明顯上調(diào)，Cyclin D1基因的表達(dá)無變化。