46,XY女性性逆轉(zhuǎn)患者的SF-1基因分析研究.pdf

1、背景與目的:
　　 性逆轉(zhuǎn)綜合征是一種由于性別決定和分化異常導(dǎo)致的兩性畸形,其主要特征是患者的核型與表型相反,分為46,XX男性和46,XY女性兩型。目前對于性腺分化的分子機(jī)制、信號途徑了解還很不夠,對人類性腺分化的遺傳調(diào)控的了解,也是問題遠(yuǎn)多于答案。通過遺傳分析性逆轉(zhuǎn)患者來研究胚胎性腺發(fā)育和分化等相關(guān)基因是一條比較便捷的通道。SF-1(又名NR5A1,FTZ-F1,Ad4BP)是核受體家族的一員,調(diào)節(jié)多數(shù)性腺發(fā)育和生殖基因,是

2、和下丘腦-腦垂體-生成類固醇軸相關(guān)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)基因。SF-1基因敲除老鼠展示了完全的腎上腺和性腺發(fā)育不全。隨著在XY性腺發(fā)育不全和原發(fā)卵巢功能不全中不斷發(fā)現(xiàn)的SF-1基因突變充分說明了SF-1在腎上腺和性腺功能的操控和維護(hù)中起到了關(guān)鍵的作用。因而SF-1是引起合并或無腎上腺衰竭的46,XY性腺發(fā)育障礙的原因。本實驗通過測序分析XY女性性逆轉(zhuǎn)患者的SF-1基因突變情況來進(jìn)一步認(rèn)證SF-1與XY女性性逆轉(zhuǎn)的相關(guān)性。
　　 方法:<

3、br>　　 收集2007年1月至2009年9月到我院就診的女性臨床表型但染色體核型卻為46,XY的性逆轉(zhuǎn)患者的EDTA抗凝全血和血清樣本6例。首先檢測血清性激素系列和皮質(zhì)醇,然后抽提DNA,再根據(jù)SF-1的2～7外顯子的序列設(shè)計的引物進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)反應(yīng)。最后對PCR產(chǎn)物直接測序分析以及對PCR產(chǎn)物檢出的突變進(jìn)行連接質(zhì)粒后再測序和限制性內(nèi)切酶分析的驗證突變分析。針對未見報道的新突變,篩查110名表型和核型一致的無關(guān)個體,排除

4、多態(tài)的可能。
　　 結(jié)果:
　　 在樣本4的Exon4中檢出了一個的新的突變(p.V128A)和一個報道過的多態(tài)突變(p.G146A)。樣本1中也檢出了一個和樣本4相同的多態(tài)突變。P.V128A在110例正常對照人群中未發(fā)現(xiàn)相同的突變,p.G146A在正常對照人群中檢出了37.3％的突變率。6例樣本中除了樣本2的皮質(zhì)醇低于正常值提示可能合并有腎上腺功能不全外,其余樣本腎上腺功能均正常。
　　 結(jié)論: