用抑制性差減雜交篩選Kaposi肉瘤相關(guān)基因.pdf_第1頁(yè)
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1、　　本研究旨在篩選KS腫瘤組織與正常皮膚組織間差異表達(dá)基因，建立KS差異基因cDNA文庫(kù)，從分子水平探討KS發(fā)病機(jī)制。采集1例典型KS患者新鮮KS腫瘤組織，同時(shí)選取該患者完全正常的皮膚組織作為對(duì)照，抽提總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成雙鏈cDNA(dscDNA)，經(jīng)RsaI酶切后，分別以正常組織和腫瘤組織作為tester和driver，進(jìn)行雙向抑制性差減雜交(Suppressionsubtractivehybridization，SSH)，篩選KS

2、腫瘤組織與正常皮膚組織間差異表達(dá)基因，將差異基因PCR擴(kuò)增，與PGEM-Teasy克隆載體連接，轉(zhuǎn)化DH5α大腸桿菌，構(gòu)建差異基因文庫(kù)。采用藍(lán)白斑篩選，獲得白色陽(yáng)性克隆菌落，煮沸破菌，PCR擴(kuò)增出未知基因片段作進(jìn)一步篩選。采用Blastn、Blastx與Genebank進(jìn)行同源性比較。 研究結(jié)論：經(jīng)雙向抑制性差減雜交初步篩選了KS差異表達(dá)基因，獲取了KS差異表達(dá)基因文庫(kù)。并通過(guò)測(cè)序發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)的抗原CD164可能通過(guò)粘附作用、促

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