核孔蛋白和蛋白乙?；滦椭兴幹委煇盒匝翰〉姆肿影悬c(diǎn).pdf

1、第一部分 魚(yú)藤素對(duì)Burkitt淋巴瘤細(xì)胞周期及細(xì)胞周期蛋白的調(diào)節(jié)作用 目的：研究魚(yú)藤素對(duì)人類(lèi)Burkitt淋巴瘤Raji和Daudi細(xì)胞系體外抗腫瘤作用，對(duì)比研究其對(duì)正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞的細(xì)胞毒性，探討其抗癌作用的分子機(jī)理。 方法：采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，Hoechst33258染色和Annexin-V/PI雙標(biāo)法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布，Westernblot檢測(cè)魚(yú)藤素對(duì)Daudi細(xì)胞

2、CyclinD1及pRb蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果：(1)魚(yú)藤素對(duì)Raji和Daudi細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用，而對(duì)正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞增殖抑制作用不明顯。(2)魚(yú)藤素可以誘導(dǎo)Raji和Daudi細(xì)胞凋亡，Hoechst33258染色可見(jiàn)Raji細(xì)胞產(chǎn)生典型凋亡細(xì)胞特征。AnnexinV-PI雙標(biāo)法顯示魚(yú)藤素以劑量依賴(lài)式誘導(dǎo)Daudi細(xì)胞早期凋亡。(3)魚(yú)藤素作用Daudi細(xì)胞周期發(fā)生變化，0、10、20和40nmol/L魚(yú)

3、藤素作用Daudi細(xì)胞24h，使細(xì)胞周期聚積于G1/G0期，G1/G0期比例從37.34％逐漸增加至56.56％，呈劑量依賴(lài)式逐漸增加；相反S期呈劑量依賴(lài)式逐漸降低，其比例從37.72％逐漸降低至21.36％。而對(duì)G2/M期細(xì)胞作用不明顯。魚(yú)藤素作用Raji細(xì)胞周期發(fā)生變化，主要使細(xì)胞周期聚積于G2/M期，0、10、20和40nmol/L魚(yú)藤素作用Raji細(xì)胞24h，G2/M期細(xì)胞比例從13.04％增加至54.7％。(4)魚(yú)藤素對(duì)正常人

4、外周血單個(gè)核細(xì)胞無(wú)明顯抑制增殖作用。(5)魚(yú)藤素以劑量依賴(lài)式使CyclinD1及pRb蛋白表達(dá)降低。 結(jié)論：魚(yú)藤素能夠抑制Raji和Daudi細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，使Daudi細(xì)胞阻滯于G1/G0期而使Raji細(xì)胞阻滯于G2/M期，魚(yú)藤素對(duì)正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞無(wú)明顯細(xì)胞毒作用，而選擇性作用于腫瘤細(xì)胞。其對(duì)抗腫瘤機(jī)制可能通過(guò)下調(diào)CyclinD1和pRb蛋白表達(dá)有關(guān)。 第二部分 魚(yú)藤素對(duì)U937細(xì)胞周期及核孔蛋

5、白Nup98和Nup88調(diào)控作用 目的：研究魚(yú)藤素對(duì)人類(lèi)單個(gè)核白血病細(xì)胞株U937細(xì)胞系體外抗腫瘤作用，研究其引起細(xì)胞周期與核孔蛋白Nup98和Nup88的改變，探討其抗癌作用的分子機(jī)理。 方法：采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布，激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)Nup98和Nup88蛋白表達(dá)變化，免疫電鏡和流式細(xì)胞儀觀測(cè)魚(yú)藤素對(duì)Nup98和Nup88的調(diào)控，Westernblot檢測(cè)魚(yú)藤素對(duì)U937細(xì)胞Nup

6、98和Nup88蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果：(1)魚(yú)藤素對(duì)U937細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用，其抑制作用呈時(shí)間與劑量依賴(lài)式。(2)魚(yú)藤素可以誘導(dǎo)U937細(xì)胞凋亡，Hoechst33258染色可見(jiàn)典型凋亡細(xì)胞特征。(3)魚(yú)藤素作用U937后細(xì)胞周期發(fā)生變化，0、5、10、20、40nmol/L魚(yú)藤素處理U937細(xì)胞24h，主要使細(xì)胞阻滯于S期和G2/M期，而G1/G0期細(xì)胞呈濃度依賴(lài)式降低。G1/G0期細(xì)胞比例依次為73.01％，71

7、.15％，68.42％，52.45％，43.99％和22.82％，S期細(xì)胞比例依次為17.18％，16.3％，18.09％，27.56％，31.21％和46.85％，G2/M期細(xì)胞比例依次為9.75％，12.31％，13.09％，18.99％，24.83％和27.79％。(4)魚(yú)藤素可以調(diào)節(jié)U937細(xì)胞Nup98和Nup88的表達(dá)，低濃度(nmol水平)即可使Nup98表達(dá)下調(diào)，而使Nup88表達(dá)上調(diào)，這為魚(yú)藤素抗腫瘤機(jī)理的研究提供了重

8、要的理論依據(jù)。 結(jié)論：魚(yú)藤素能夠抑制U937細(xì)胞增殖，使細(xì)胞阻滯于S期和G2/M期，而G1/G0期細(xì)胞呈濃度依賴(lài)式降低，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。其抗腫瘤機(jī)制可能通過(guò)參與調(diào)控U937細(xì)胞Nup98和Nup88的表達(dá)，使Nup98表達(dá)下調(diào)，而使Nup88表達(dá)上調(diào)有關(guān)。 第三部分 姜黃素作為新型的組蛋白去乙?；敢种普{(diào)控B細(xì)胞系淋巴瘤的增殖作用 目的：了解姜黃素對(duì)B細(xì)胞系淋巴瘤細(xì)胞系Raji細(xì)胞組蛋白去乙?；?HDA

9、C1，HDAC3，HDAC8)和乙酰化的組蛋白H4(Ac-HistoneH4)的影響，探討其對(duì)抑制淋巴瘤細(xì)胞增殖的分子機(jī)制。 方法：采用四唑鹽(MTT)比色檢測(cè)檢測(cè)Raji細(xì)胞增殖，免疫印跡(Westernblot)檢測(cè)Raji細(xì)胞HDAC1，HDAC3，HDAC8和Ac-HistoneH4的影響，運(yùn)用免疫組織細(xì)胞化學(xué)觀察Raji細(xì)胞HDAC1，HDAC3，HDAC8和Ac-HistoneH4的蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：(1)

10、姜黃素對(duì)Raji細(xì)胞可明顯增殖抑制作用。(2)25μmol/L姜黃素作用Raji細(xì)胞24h，免疫組織細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示HDAC1，HDAC3，HDAC8的吸光度與未處理組相比較，明顯下降(p＜0.05)；(3)25μmol/L姜黃素作用Raji細(xì)胞24h，免疫組織細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示Ac-HistoneH4的吸光度與未作用組相比較，明顯增加(p＜0.05)；(4)6.25，12.5和25μmol/L姜黃素處理Raji細(xì)胞24h，免疫印跡檢測(cè)顯