載體介導(dǎo)的siRNA對(duì)LoVo細(xì)胞中VEGFR表達(dá)的抑制作用.pdf

1、目的：構(gòu)建靶向血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體3(VEGFR-3)基因的小干擾RNA(siRNA)表達(dá)載體(psiRNA-VEGFR-3)，轉(zhuǎn)染至人結(jié)腸癌細(xì)胞中，檢測(cè)這一表達(dá)載體是否能在人結(jié)腸癌細(xì)胞株LoVo細(xì)胞中引發(fā)RNAi效應(yīng)，能否阻抑VEGFR-3基因表達(dá)，及阻抑VEGFR-3基因表達(dá)后腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡率變化等生物學(xué)效應(yīng)的改變，探討VEGFR-3在腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)中的作用，期望為結(jié)腸癌基因治療提供新的途徑。 方法：GenBank中查找V

2、EGFR-3基因全序列，作為靶基因，按照sirNA設(shè)計(jì)、合成三對(duì)VEGFR-3編碼基因的反向重復(fù)序列，中間間隔9個(gè)核苷酸序列，并設(shè)計(jì)、合成一對(duì)非特異性對(duì)比序列，退火形成短雙鏈RNA，通過(guò)定向克隆至線形載體pSUPER，構(gòu)建siRNA真核表達(dá)載體，酶切鑒定表達(dá)載體，利用Lipofeetamine2000將構(gòu)建的psiRNA-VEGFR-3載體轉(zhuǎn)入LoVo細(xì)胞中，應(yīng)用半定量RT-PCR檢測(cè)基因轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞VEGFR-3 mRNA表達(dá)水平的