bFGF、BPE及Forskolin對體外培養(yǎng)嗅鞘細胞增殖的影響及量效關(guān)系的探討.pdf

1、本研究分為兩個部分。 第一部分：新生大鼠嗅球嗅鞘細胞的分離、培養(yǎng)、純化與生物學(xué)特性的研究 目的： 探討新生2天大鼠嗅球OECs分離培養(yǎng)和純化方法，并觀察其形態(tài)學(xué)變化及免疫細胞化學(xué)特性。 方法： 采用原代培養(yǎng)技術(shù)，從新生2天大鼠的嗅球分離培養(yǎng)OECs，用差速貼壁+化學(xué)藥物等方法純化培養(yǎng)OECs，倒置相差顯微鏡下觀察OECs形態(tài)變化特點及生長情況，采用NGFRp75抗體行免疫細胞化學(xué)染色，根據(jù)NGFR

2、p75免疫細胞化學(xué)染色結(jié)果統(tǒng)計培養(yǎng)的OECs的純度。 結(jié)果： 體外培養(yǎng)的新生大鼠嗅球OECs主要為雙極或三極細胞，其突起細長。未經(jīng)純化則成纖維細胞生長迅速7天后明顯占據(jù)優(yōu)勢，而三種純化方法中差速貼壁+化學(xué)藥物+胰酶快速消化法的純化效率高于其他兩種。免疫細胞化學(xué)染色顯示，培養(yǎng)的新生大鼠嗅球OECs呈現(xiàn)NGFRp75染色陽性。 結(jié)論： 差速貼壁+化學(xué)藥物+胰酶快速消化法是一種高效率的純化培養(yǎng)嗅球OECs的方法

3、。 第二部分：bFGF、BPE及Forskolin對嗅鞘細胞增殖的影響及量效關(guān)系的探討 目的： 探討牛垂體提取物、bFGF及Forskolin對嗅鞘細胞增殖的影響及劑量一效應(yīng)關(guān)系，為OECs移植治療SCI提供種子細胞。 方法： 采用原代培養(yǎng)技術(shù)，從新生大鼠的嗅球分離培養(yǎng)OECs，并用差速貼壁+化學(xué)藥物+胰酶快速消化法純化培養(yǎng)OECs，添加牛垂體提取物、bFGF及Forskolin三種促增殖因子以及

4、因子組合。MTT法檢測各組生長因子以及因子組合對嗅鞘細胞生長情況的影響。采用NGFRp75抗體行免疫細胞化學(xué)染色，根據(jù)NGFRp75免疫細胞化學(xué)染色結(jié)果統(tǒng)計培養(yǎng)的OECs的純度，并計算OECs的增值率。 結(jié)果： OECs原代培養(yǎng)并純化后添加牛垂體提取物后具有促進OECs增殖的效應(yīng)，但未見典型的劑量一效應(yīng)關(guān)系；添加bFGF后具有促進OECs增殖的效應(yīng)，且呈現(xiàn)典型的劑量一效應(yīng)關(guān)系；添加Forskolin后并不具有促進OECs