ERK-1-2在移植靜脈中的表達及其與MMP-2，MMP-9之間變化關系的研究.pdf

1、目的：研究細胞外信號調節(jié)激酶（ERK-1/2）, MMP-2，MMP-9在自體移植靜脈中的表達及ERK-1/2與MMP-2，MMP-9之間變化的相互關系。
　　方法：采用3+0.5 kg成年健康大白兔45只，隨機分為正常組3只（Control組），手術組42只。手術組建立自體頸外靜脈翻轉行頸動脈轉流手術模型，其中一組是將頸外靜脈置于含0.8％DMSO的緩沖液中培養(yǎng)30min后吻合在頸總動脈上（VG組），而另一組是將靜脈置于含80μ

2、mol/l U0126的緩沖液中培養(yǎng)30min后再吻合到頸總動脈上（VG/UO組）。分別與術后1h,3h,1d,3d,7d,14d,28d犧牲大白兔，獲取實驗段血管，正常組直接取頸外靜脈。采用HE染色觀察血管組織以及細胞的結構變化、采用 Western-Blot方法檢測ERK-1/2,P-ERK-1/2,PCNA,MMP-9,MMP-2蛋白的表達。
　　結果：
　　1、動物模型建立成功,移植靜脈血流通暢
　　2、HE染

3、色見：術后3d VG組移植靜脈橋較VG/UO、control組有明顯內皮損傷，7d有新生內膜形成，平滑肌細胞增生，14d、28d新生內膜進一步增厚，平滑肌細胞變性，表型改變，有明顯的平滑肌向內皮側遷移，而VG/UO組內膜較完整，未見明顯的平滑肌細胞向內皮側遷移。
　　3、Western blot檢測ERK-1/2,P-ERK-1/2,PCNA,MMP-2,MMP-9結果
　　3.1、P-ERK-1/2的表達：（a）VG組靜脈

4、移植后30min，P-ERK1/2蛋白表達明顯增強，與正常靜脈比較差異有顯著性(P<0．05)，在移植3h和3d表達達高峰，呈現(xiàn)雙峰現(xiàn)象，與其余時點比較差異有顯著性(P<0．01)，28d后恢復接近正常水平。（b）VG/UO組移植靜脈P-ERK1/2蛋白表達明顯減少，術后未見明顯的活化高峰，在術后28d后僅有極少量的表達，與Control組靜脈P-ERK1/2蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　3.2、 PCNA蛋白的

5、表達：（a）VG組靜脈移植術后3h開始有明顯的蛋白表達，隨后表達逐漸增多，與Control組靜脈PCNA蛋白比較差異有顯著性（P<0.05）, VG組PCNA與P-ERK1/2表達呈正相關(P<0．01)。（b）VG/UO組PCNA蛋白表達明顯下調，Control組靜脈PCNA蛋白比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）與在術后28d表達基本上消失.
　　3.2、MMP-9蛋白的表達：（a）Control組移植靜脈MMP-9蛋白有少量

6、表達。（b）VG組移植靜脈MMP-9蛋白在移植術后3h表達就開始增加，與Control組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），在移植后1d達到高峰，與本組其余時點比較差異顯著（P<0.05），表達隨后逐漸降低，在28d降至基礎水平。（c）VG/UO組移植靜脈中MMP-9蛋白的表達明顯下調，僅在術后3d有少量表達，也未見明顯的高峰發(fā)現(xiàn)，在14d MMP-9蛋白的表達幾乎消失，全時點表達與Control組比較差異無顯著性（P>0.05），V

7、G組與VG/UO組移植靜脈中MMP-9蛋白在相同時段的表達有明顯差異（P<0.05）。
　　3.4、MMP-2的表達：（a）Control組移植靜脈MMP-2蛋白幾乎沒有表達（b）VG組移植靜脈MMP-2蛋白表達從術后1d開始增加，增加呈時間依賴性，增加一直持續(xù)至術后28d。（c）VG/UO組MMP-2蛋白表達明顯減少，僅在術后3d開始有少量表達，至28d基本消失，與control組比較無統(tǒng)計學意義（P>0.05）.VG組和VG/

8、UO組MMP-2蛋白表達在相同時段比較有明顯差異（P<0.05）。
　　結論：
　　（1）ERK-1/2的激化可能是內膜增生的關鍵環(huán)節(jié)，通過抑制ERK1/2的活化可以抑制內膜增生，阻止移植血管再狹窄；
　　（2）血管重塑使移植靜脈發(fā)生了形態(tài)結構和功能的動態(tài)變化，其結構變化包括細胞增殖、死亡、遷移以及細胞外基質(ECM)的合成和降解，MMP-2， MMP-9的活化參與血管再狹窄過程；
　?。?）ERK-1/2活化介