Ai-2群體感應(yīng)系統(tǒng)對禽致病大腸桿菌耐藥性的調(diào)控機制研究.pdf

1、禽致病大腸桿菌家禽養(yǎng)殖業(yè)中常見的致病菌之一，是制約中國家禽養(yǎng)殖業(yè)持續(xù)發(fā)展，給養(yǎng)殖場和相關(guān)肉、蛋等副產(chǎn)業(yè)帶來巨大損失的原因之一。抗生素的長期使用已使得禽致病大腸桿菌的耐藥性不斷增強，成為當(dāng)今養(yǎng)殖業(yè)面臨的重要難題，通過研究大腸桿菌耐藥的發(fā)生與轉(zhuǎn)移的調(diào)控機制，尋找新的防治耐藥大腸桿菌的潛在藥物靶點，對控制禽致病大腸桿菌耐藥菌株的感染具有十分重要的意義。群體感應(yīng)系統(tǒng)是普遍見于各類細(xì)菌的重要調(diào)控系統(tǒng)，Autoinducer-2(AI-2)是大腸桿

2、菌產(chǎn)生的主要群體感應(yīng)信號分子，在多重耐藥的禽致病大腸桿菌中，AI-2與其致病性及耐藥基因的表達調(diào)控是否有關(guān)聯(lián)，學(xué)術(shù)界鮮有報道。
　　探尋了AI-2對禽致病大腸桿菌卡那霉素耐藥性的影響效應(yīng)，進而研究其對卡那霉素耐藥基因aadA的調(diào)控機制，發(fā)現(xiàn)AI-2群體感應(yīng)系統(tǒng)能夠通過下調(diào)aadA的表達水平使禽致病大腸桿菌對卡納霉素更加敏感。
　　1.為了檢測禽致病大腸桿菌分離株的耐藥性，本試驗利用二倍稀釋法檢測了禽致病大腸桿菌分離株APEC

3、28，APEC32和APEC56對卡那霉素的耐藥性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，APEC28，APEC32和APEC56對卡那霉素的最小抑菌濃度分別為2.5mg/mL，2.5mg/mL和5mg/mL，表明APEC28，APEC32和APEC56這三株禽致病性大腸桿菌分離株為卡那霉素耐藥菌。
　　2.本試驗利用PCR擴增技術(shù)和BLAST軟件進行對比分析檢測禽致病大腸桿菌分離株的耐藥基因。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，耐藥基因aadA編碼腺嘌呤轉(zhuǎn)移酶，是導(dǎo)致禽致病大腸桿菌

4、耐藥的主要原因。
　　3.本試驗利用生長曲線法和菌落計數(shù)法(CFU)通過體外添加AI-2檢測其對禽致病大腸桿菌生長的影響，結(jié)果表明，體外添加AI-2可使APEC28，APEC32和APEC56的耐藥性降低。進而證明禽致病大腸桿菌分離株可通過AI-2下調(diào)其耐藥性。
　　4.本試驗利用反轉(zhuǎn)錄實時熒光定量PCR(RT-qPCR)技術(shù)檢測卡那耐藥基因aadA的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果顯示，在卡那霉素壓力下，體外添加AI-2會導(dǎo)致APEC28的

5、卡那耐藥基因aadA的轉(zhuǎn)錄水平在不同時間分別降低1.75倍、2.6倍和1.2倍;APEC32的卡那耐藥基因aadA的轉(zhuǎn)錄水平在不同時間分別降低1.2倍、2.7倍和1.5倍;APEC56的卡那耐藥基因aadA的轉(zhuǎn)錄水平在不同時間分別降低1.5倍、2倍和1.2倍。
　　本項目擬以前期研究為基礎(chǔ)，利用微生物學(xué)、分子生物學(xué)等研究手段，探尋AI-2群體感應(yīng)對禽致病大腸桿菌卡那霉素抗性基因aadA表達的影響及調(diào)控機制，該研究的進一步深入或可為