Dynamin-1敲除小鼠繁殖飼養(yǎng)、基因分型和Dynamin-1對腎上腺嗜鉻細胞分泌融合小孔的調節(jié)作用.pdf

1、Dynamin，又稱動力蛋白或發(fā)動蛋白，是一類96kD大小，具有鳥苷三磷酸酶(guanosine triphosphatase, GTPase)活性的蛋白質家族。已發(fā)現Dynamin家族廣泛參與真核細胞泡管狀膜結構的縮緊、閉合與脫離，并參與細胞骨架再構建過程，參與細胞器的質膜運轉與回收，細胞囊泡分泌與內吞等多重功能。
　　對于神經與神經內分泌系統，有效回收囊泡并構成有序的循環(huán)，是維持神經元或神經內分泌細胞正常生理功能的重要環(huán)節(jié)。而

2、主要分布于神經與神經內分泌系統的Dynamin1介導多種內吞囊泡與質膜離斷，使內吞囊泡順利輸送至胞內，以維持神經元或神經內分泌細胞的正常生理功能。Dynamin1的突變至今被發(fā)現是某些神經系統疾病的病因，如：癲癇、神經退型性疾病，并可能引起某類腎病綜合癥與腎衰。
　　根據國際上觀點與實驗室先前的研究，發(fā)現不論以突變或分子物質干擾Dynamin1，不但影響細胞的內吞功能，同時還影響分泌。耶魯大學De Camilli實驗室為排除Dyn

3、amin1于內吞作用研究中，使用突變或藥物而產生的非特異作用，于2007年構建Dynamin1敲除小鼠(Dynamin1 Knockout mice)。目前，利用轉基因動物對Dynamin1于分泌中的效應研究仍然闕如，為進一步研究Dynamin1于囊泡分泌中的功能，我們引進De Camilli實驗室構建的Dynamin1敲除小鼠，進行轉基因小鼠動物模型的基因分型鑒定與照護傳代，保證遺傳背景一致的條件下改善動物質量，并利用電化學、電生理與

4、電鏡方法，觀察腎上腺嗜鉻細胞Dynamin1對囊泡分泌的影響。我的研究發(fā)現：
　　1.Dynamin1 KO小鼠胚胎能順利發(fā)育與產出，但隨Dynamin1缺失的影響顯現，于一周內死亡。
　　2.Dynamin1 KO小鼠乳鼠體重剛出生時與同窩其他基因型乳鼠無明顯差異，但隨日齡增加體重無明顯增長，于24到48小時后出現體重輕于同窩野生型與雜合型乳鼠的現象。
　　功能分析方面我和劉斌、吳齊輝(電生理)、王昌河(電鏡)等同學

5、的合作獲得以下初步成果：
　　3.Dynamin1 KO三天齡乳鼠腎上腺新鮮組織切片柱狀碳纖電極電化學紀錄氧化電流較同窩野生型乳鼠增加47.24％。
　　4.Dynamin1 KO三天齡乳鼠腎上腺原代培養(yǎng)嗜鉻細胞點狀碳纖電極電化學紀錄氧化電流幅度較同窩野生型乳鼠增加30%。且在半高寬不變的情況下，氧化信號峰面積積分隨電流幅度增加變化。
　　5.Dynamin1 KO三天齡乳鼠腎上腺原代培養(yǎng)嗜鉻細胞與野生型靜息情況與恢復