6-姜酚在不同環(huán)境中對(duì)HepG-2細(xì)胞殺傷和化療增敏作用的研究.pdf

1、研究背景:肝細(xì)胞癌是最常見的惡性肝膽疾病，每年約有1，000，000人病死，其發(fā)病率在逐年增加，2015到2020年將到達(dá)一個(gè)平臺(tái)期，據(jù)估計(jì)每年約有600000新發(fā)病例，并且其致死率在所有的癌癥中占第三位。目前肝細(xì)胞癌的治療包括以下幾種，主要分為局限性治療和全身性治療兩大類，局限性治療包括外科手術(shù)、肝移植、經(jīng)皮射頻消融、肝動(dòng)脈化療栓塞療法、選擇性內(nèi)部放療法，全身性治療包括化療、免疫激素治療、射靶療法、分子靶向治療等，臨床中主要采取外科手

2、術(shù)和化療相結(jié)合的綜合治療模式，但是病人的預(yù)后不佳。阿霉素(多柔比星doxorubicinhydrochloride，DOX，adriamyein，ADM)，屬于蒽環(huán)類抗腫瘤藥物，在癌癥的化療中起到了重要的作用，但由于其心臟毒性，限制了劑量的提高和化療效果。另外肝癌化療副作用明顯，腫瘤多藥耐藥比例高且費(fèi)用昂貴使得相當(dāng)一部分患者不能耐受被迫治療中斷而致療效不佳。因此，尋求高效、低毒、價(jià)廉的抗腫瘤方法是目前研究的熱點(diǎn)之一。6-姜酚(6-gin

3、gerol)是生姜的主要活性成分，研究證實(shí)其有強(qiáng)心、防治心血管疾病、抗凝血、抗氧化、抗腫瘤、抗炎、健胃與抗胃潰瘍作用、保肝利膽、防腐殺蟲、驅(qū)蟲等生物活性。近年來(lái)，一系列體外實(shí)驗(yàn)表明，6-姜酚具有廣譜的抗腫瘤活性，但其有效性和安全性仍需臨床試驗(yàn)檢驗(yàn)。
　　研究目的:對(duì)比6-姜酚在正常模式和低氧低糖模式兩種下對(duì)于HepG-2細(xì)胞的殺傷和化療增敏作用。
　　研究對(duì)象及方法:人肝癌細(xì)胞株HepG-2，由山東大學(xué)生理實(shí)驗(yàn)室惠贈(zèng)。生長(zhǎng)于

4、含10％的FBS、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基，在37℃、含5％二氧化碳飽和濕度孵育箱培養(yǎng)。通過(guò)不同濃度ADM和姜酚分別刺激培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期的HepG-2細(xì)胞，采用CCK-8試劑盒檢測(cè)在不同濃度藥物刺激下HepG-2細(xì)胞的增殖反應(yīng)。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合PI及AnnexinV-FITC雙標(biāo)染色法檢測(cè)ADM、姜酚及兩者聯(lián)合作用后細(xì)胞的凋亡情況。采用RT-PCR法檢測(cè)bcl-2、bax以及birc-5mRNA的表達(dá)情

5、況。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0軟件軟件包完成。
　　研究結(jié)果:6-姜酚、ADM作用于HepG-2細(xì)胞后，細(xì)胞生長(zhǎng)受到明顯抑制。兩種模式下6-姜酚組以及阿霉素組的抑制率隨濃度的升高而升高，抑制率具有濃度依賴性。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示兩種培養(yǎng)條件下實(shí)驗(yàn)組各濃度組細(xì)胞凋亡百分比均比對(duì)照組增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩藥聯(lián)用組的凋亡數(shù)最高，且低氧低糖組各濃度組的凋亡數(shù)高于正常培養(yǎng)各濃度組。Real-timePCR檢測(cè)表明:正常培養(yǎng)條件下

6、與對(duì)照組相比實(shí)驗(yàn)組bcl-2、birc-5表達(dá)降低，bax表達(dá)無(wú)明顯變化。低氧低糖條件下與對(duì)照組相比實(shí)驗(yàn)組bcl-2、birc-5表達(dá)明顯降低,bax表達(dá)增高。在低氧低糖環(huán)境下bcl-2的表達(dá)較正常培養(yǎng)條件下的表達(dá)明顯增高，而bax、birc-5表達(dá)明顯減少，bcl-2/bax明顯高于正常培養(yǎng)組。
　　結(jié)論:6-姜酚可能通過(guò)下調(diào)birc-5的表達(dá)，降低Survivin蛋白抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡的能力對(duì)HepG-2細(xì)胞產(chǎn)生殺傷和化療增敏