腫瘤源性骨橋蛋白誘導(dǎo)MDSC促進(jìn)腫瘤免疫逃逸機(jī)制研究.pdf

1、髓系抑制性細(xì)胞(myeloid-derived suppressor cells，MDSC)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一群骨髓來(lái)源的免疫抑制細(xì)胞，大量研究表明其在腫瘤免疫逃逸中發(fā)揮重要免疫調(diào)節(jié)作用，但腫瘤中這群細(xì)胞產(chǎn)生的機(jī)制尚不清楚。骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)是一種磷酸化的分泌型糖蛋白，與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。有研究認(rèn)為OPN的功能是多重的，既能影響宿主免疫的細(xì)胞功能，又能影響腫瘤侵襲中的轉(zhuǎn)化細(xì)胞功能。OPN可以在轉(zhuǎn)錄和翻譯后進(jìn)行修

2、飾，不同細(xì)胞來(lái)源的OPN可以有多種多樣的結(jié)構(gòu)特征，從而具備不同的生物學(xué)功能。本研究探討腫瘤來(lái)源的OPN對(duì)MDSC擴(kuò)增的影響。
　　 以C57BL/6小鼠脾臟細(xì)胞為靶細(xì)胞，體外實(shí)驗(yàn)肺癌細(xì)胞3LL的上清可有效擴(kuò)增MDSC的頻率;體內(nèi)實(shí)驗(yàn)小鼠皮下接種肺癌3LL細(xì)胞建立小鼠成瘤模型，分析MDSC的表型及功能，結(jié)果顯示肺癌模型小鼠脾臟細(xì)胞中MDSC的頻率顯著增加。ELISA檢測(cè)3LL細(xì)胞上清中OPN的表達(dá)水平明顯高于正常肺組織上清。體內(nèi)外

3、實(shí)驗(yàn)中OPN抗體可以有效抑制MDSC頻率的增加。轉(zhuǎn)導(dǎo)短發(fā)卡結(jié)構(gòu)質(zhì)粒shRNA沉默3LL細(xì)胞中OPN的表達(dá)，轉(zhuǎn)染后的3LL細(xì)胞做體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，OPN的下調(diào)抑制了脾臟中MDSC頻率，同時(shí)肺癌細(xì)胞的成瘤能力明顯下降，腫瘤發(fā)生發(fā)展遲緩，表明腫瘤來(lái)源的OPN(T-OPN)具有擴(kuò)增MDSC的功能，而來(lái)源于正常組織的OPN(N-OPN)不具備這種功能。OPN存在四種不同的剪切變體形式，并且不同形式在3LL中水平不同，但對(duì)MDSC的擴(kuò)增作用無(wú)顯著差異。實(shí)

4、時(shí)定量PCR技術(shù)及流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)，相較于正常小鼠脾臟細(xì)胞，模型組MDSC高表達(dá)CD44，并且體外實(shí)驗(yàn)抗CD44抗體阻斷后，MDSC頻率明顯下降，說(shuō)明T-OPN通過(guò)與MDSC表面CD44結(jié)合發(fā)揮作用。通過(guò)細(xì)胞增殖及凋亡實(shí)驗(yàn)闡明MDSC頻率增加的機(jī)制，結(jié)果表明MDSC的通過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增。
　　 因此，T-OPN具有擴(kuò)增MDSC的功能，其作用機(jī)制是與MDSC表面CD44結(jié)合發(fā)揮作用，擴(kuò)增MDSC介導(dǎo)肺癌腫瘤的免疫逃逸。我們的研究