冬葵子抗腫瘤蛋白誘導細胞凋亡分子機制研究.pdf

1、錦葵科植物冬葵在我國的內蒙古、四川、山西、云南等省份均有生長。其種子冬葵子是它的干燥成熟果實，在我國臨床上廣泛應用為抗炎藥材。據(jù)“本草綱目”記載，冬葵子歸經(jīng)于大腸經(jīng)和膀胱經(jīng)，它對消化和泌尿系統(tǒng)有消炎、抗菌作用。雖然冬葵子在中藥抗腫瘤方劑中常常用到，但關于冬葵子作為抗癌中藥的機理報道較少。本研究從冬葵子中分離獲得一種具有抗腫瘤活性的蛋白MSP，并從以下三個方面探討其分子機制：
　　第一部分：應用蛋白質分離純化技術，從冬葵子中獲得具抗

2、腫瘤活性的單一蛋白，命名為MSP。質譜鑒定顯示，MSP與人源性mRNA前體剪切復合物Pcf11蛋白具有99.729％的同源性。采用MTT法對其活性進行檢測，結果表明MSP能影響人結腸癌細胞DLD1和人膀胱癌細胞T24的存活。
　　第二部分：通過流式細胞儀檢測MSP對人正常上皮細胞FHC和癌細胞DLD1、T24細胞周期的影響；Western blotting檢測DLD1細胞周期相關蛋白表達水平。結果表明，MSP下調了c-Myc，Cy

3、clin D1和P-Rb蛋白的表達，誘導癌細胞DLD1和T24細胞周期發(fā)生G1期阻滯，但對FHC細胞周期沒有明顯影響。
　　第三部分：通過流式細胞儀和DAPI染色法檢測MSP對正常細胞FHC和癌細胞DLD1、T24細胞凋亡的影響；采用JC-1染色法觀察MSP處理對這三種細胞線粒體膜電位的影響；Western檢測DLD1細胞內外源性凋亡途徑相關蛋白的表達。結果表明，MSP通過上調Fas、FasL,提高caspases-8&3表達，激