周期聯(lián)合甲氨蝶呤、來(lái)氟米特和環(huán)磷酰胺治療逆轉(zhuǎn)CIA大鼠MRP1表達(dá)的研究.pdf

1、背景：
　　 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoidarthritis，RA)是一種高度致殘性的慢性自身免疫性疾病，使用改變病情抗風(fēng)濕藥(diseasemodifyinganti-rheumaticdrugs，DMARDs)是治療RA的重要策略，可明顯降低致殘率。然而在應(yīng)用DMARDs治療過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)一個(gè)重要現(xiàn)象是藥物療效逐漸減弱，細(xì)胞的耐藥性可能起著重要的作用。RA中剛認(rèn)識(shí)耐藥的重要性，而在腫瘤和感染性疾病的治療中研究較多。多藥耐

2、藥的發(fā)生是多種耐藥蛋白共同參與的結(jié)果，其中多藥耐藥蛋白1（multidrugresistancepro-tein，MRP1）就是重要的耐藥分子之一。我們通過(guò)10余年的臨床及基礎(chǔ)研究已證實(shí)周期特異性藥物（來(lái)氟米特leflunomide，LEF、甲氨蝶呤methotrexate，MTX）聯(lián)合周期非特異性藥物環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide，CTX)有協(xié)同效應(yīng)。本研究進(jìn)行了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，建立膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎模型(collagenin

3、ducedarthritis，CIA)，驗(yàn)證周期特異性藥物聯(lián)合周期非特異性藥物是否逆轉(zhuǎn)耐藥；進(jìn)一步從耐藥分子MRP1的角度進(jìn)行協(xié)同效應(yīng)機(jī)制的研究，周期特異性藥物對(duì)抑制MRP1是否存在協(xié)同效應(yīng)。
　　 目的：
　　 1.研究CIA大鼠和應(yīng)用DMARDs藥物治療后各組大鼠脾臟淋巴細(xì)胞中MRP1表達(dá)的差異；
　　 2.探討周期聯(lián)合MTX、LEF、CTX在影響CIA大鼠脾臟淋巴細(xì)胞MRPI的表達(dá)方面的協(xié)同效應(yīng)機(jī)制。

4、>　　 3.探討影響CIA大鼠脾臟淋巴細(xì)胞MRP1表達(dá)的相關(guān)因素；
　　 方法：
　　 本研究選取SD大鼠80只，建立Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的雌性SD大鼠CIA模型，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、造模對(duì)照組、單藥組（LEF組、MTX組、CTX組）、聯(lián)合治療組(MTX+LEF組、MTX+CTX組、LEF+CTX組)，每組10只。進(jìn)行9周動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，初次免疫后3周開(kāi)始給藥。在給藥過(guò)程中連續(xù)對(duì)大鼠的關(guān)節(jié)炎癥程度進(jìn)行評(píng)分，游標(biāo)卡尺測(cè)量雙后肢的足腫脹

5、度。治療6周后全部動(dòng)物處死取材，再經(jīng)固定、脫鈣、包埋，制成切片。然后各組大鼠行HE染色觀察踝關(guān)節(jié)滑膜的組織病理學(xué)改變。進(jìn)一步通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定各治療組脾臟淋巴細(xì)胞MRP1的表達(dá)，其表達(dá)情況用平均熒光強(qiáng)度(meanrelativefluorescenceintensity，MFI)值表示，比較各個(gè)組間的MFI值，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.CIA大鼠造模成功率達(dá)92.3％(72/78)。癥狀、影像學(xué)、病理評(píng)估均

6、證實(shí)造模成功，該模型為慢性關(guān)節(jié)炎。
　　 2.關(guān)節(jié)炎指數(shù)(arthritisindex，AI):單藥(MTX、LEF、CTX)和聯(lián)合治療(MTX+CTX、MTX+LEF、LEF+CTX)組AI均較模型組有明顯改善，聯(lián)合治療組優(yōu)于單藥組(P＜0.05)，各聯(lián)合治療組之間及各單藥組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；聯(lián)合治療組足腫脹度改善明顯，與CIA組及單藥組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，各聯(lián)合治療組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

7、
　　 3.HE關(guān)節(jié)病理改變：各治療組與造模組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，LEF+CTX、MTX+CTX與MTX+LEF、單藥組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.CIA大鼠脾臟淋巴細(xì)胞MRP1的表達(dá)：?jiǎn)嗡幗M與造模組間平均熒光強(qiáng)度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；單藥治療組三組間平均熒光強(qiáng)度比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；造模組與聯(lián)合治療組間MRP1表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，單藥組與聯(lián)合治療組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，聯(lián)合組明顯優(yōu)于單藥治療組；但聯(lián)合治

8、療組間MRP1的平均熒光強(qiáng)度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用析因設(shè)計(jì)分析三組聯(lián)合治療對(duì)MRP1影響并無(wú)交互作用。提示三組聯(lián)合治療并無(wú)協(xié)同作用。
　　 5.CIA大鼠MRP1表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度與足腫脹度和TNF-a相關(guān)性：造模組大鼠MRP1表達(dá)的MFI值與足腫脹度和TNF-a間均有相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1.聯(lián)合用藥較單用藥組MRP1的表達(dá)降低，證實(shí)聯(lián)合治療一定程度上逆轉(zhuǎn)MRP1的表達(dá)。