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文檔簡介
1、目的:(1)建立可穩(wěn)定表達神經顆粒素(Neurogranin,Ng)的細胞系,用于Ng表達對T細胞功能影響的體外研究,進一步研究Ng在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic Lupus Erythematosus,SLE)的發(fā)病機制中發(fā)揮的作用。(2)研究神經顆粒素(Neurogranin,Ng)在正常人外周血單個核細胞與外周血T細胞的表達情況,確定是否可以用外周血單個核細胞Ng表達量來近似代替外周血T細胞Ng表達量,并進一步明確Ng在T淋巴
2、細胞亞群的表達及定位。(3)比較Ng在SLE和類風濕關節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis,RA)中的表達情況,進一步研究Ng在SLE中的表達是否具有特異性。
方法:(1)克隆人Ng基因,構建和包裝可表達Ng的慢病毒轉染體系,感染Jurkat細胞,利用實時熒光定量PCR技術驗證目的基因的表達。(2)收集正常人外周血60ml,淋巴細胞分離液提取外周血單個核細胞,利用流式細胞術分離得到CD4+T細胞,CD8+T細胞,采用
3、實時熒光定量PCR技術檢測外周血單個核細胞與外周血T細胞Ng的表達情況。(3)收集SLE、RA患者的外周血,利用實時熒光定量PCR技術驗證其外周血單個核細胞Ng基因的表達。
結果:(1)用表達Ng的慢病毒感染Jurkat細胞,實時熒光定量PCR技術驗證其可表達Ng基因。(2)正常人外周血T細胞與外周血單個核細胞的Ng表達量呈平行關系。(3)RA患者外周血單個核細胞Ng表達量與SLE患者外周血單個核細胞Ng表達量無明顯差異性。<
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