核方法中的最優(yōu)核選擇問題研究.pdf

1、鮑曼不動桿菌廣泛分布于自然界,可從環(huán)境、人類皮膚和粘膜中分離出來。鮑曼不動桿菌對濕熱、紫外線、化學消毒劑有較強抵抗力,常規(guī)消毒劑只能抑制其生長,不能將其殺滅。它可在病人中播散并引起醫(yī)院內(nèi)感染。近年來,隨著各種抗生素,尤其是廣譜頭孢菌素和碳青霉烯類藥物在臨床的廣泛使用,在抗生素的選擇壓力下,經(jīng)常能分離到多耐藥鮑曼不動桿菌,甚至是泛耐藥鮑曼不動桿菌,耐藥率也呈逐漸上升趨勢,因此受到國內(nèi)外學者格外關(guān)注。在很多地區(qū),已廣泛報道多耐藥鮑曼不動桿菌

2、所致的院內(nèi)感染出現(xiàn)爆發(fā)流行,泛耐藥鮑曼不動桿菌引起的醫(yī)院感染已成為全球關(guān)注的公共衛(wèi)生問題。2010年9月,Kumarasamy報告,在印度、巴基斯坦和英國發(fā)現(xiàn)一些革蘭氏陰性細菌含有“耐藥基因”(新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶New Delthi Metallo-beta-Lactamase,也稱NDM-1),對碳青霉烯類發(fā)生耐藥,并可在細菌中或菌種間廣泛復制和傳播,被稱為“超級細菌”。在日本,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)鮑曼不動桿菌攜帶NDM—1基因。鮑曼不動桿菌

3、多耐藥的機制,包括有外膜孔蛋白異常、外排泵功能變化及特異的耐藥基因盒通過可移動遺傳元件的介導后出現(xiàn)變異和傳播?？梢苿舆z傳元件包括整合子、轉(zhuǎn)座子、插入序列。整合子的水平轉(zhuǎn)移提示耐藥基因的擴散及多耐藥菌株的產(chǎn)生。轉(zhuǎn)座子可介導各種耐藥基因。插入序列能促進目的基因的表達。國內(nèi)關(guān)于外排泵mdfA基因及整合子、轉(zhuǎn)座子的研究不多,尚無插入序列ISaba4、ISaba9的研究。對碳青霉烯類耐藥的機制包括有;產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶,青霉素結(jié)合蛋白改變,外膜蛋白缺

4、失及外排泵增強。細菌產(chǎn)碳青霉烯酶是引起耐藥的主要因為。目前,國外關(guān)于鮑曼不動桿菌對碳青霉烯類耐藥情況的分析及耐藥機理的研究較多；但同時檢測B類和D類碳青霉烯酶基因以及CarO基因,國內(nèi)在這方面的研究相對較少。
　　 目的：通過檢測鮑曼不動桿菌對常用抗菌藥物和新藥替加環(huán)素的體外抗菌活性,了解鮑曼不動桿菌的耐藥特點,為臨床抗菌藥物的選擇提供依據(jù)。檢測可移動遺傳元件、化合物外排泵基因在多耐藥菌株中的存在狀況,有助于分析鮑曼不動桿菌的多

5、耐藥機制。研究多耐藥菌株對碳青霉烯類耐藥的分子機制,為指導臨床用藥,降低細菌的耐藥率和傳播建立基礎。
　　 方法：2007年8月至2010年3月,從中山大學附屬第三醫(yī)院住院患者的痰液、血液、尿液、膽汁、膿液等標本中分離所得細菌,獲得純培養(yǎng)后,經(jīng)革蘭染色、氧化酶試驗等初篩,采用全自動微生物鑒定儀鑒定菌株,收集共52株鮑曼不動桿菌。用瓊脂紙片擴散法測定鮑曼不動桿菌對13種抗菌藥物的敏感性,包括頭孢西丁,頭孢噻肟,頭孢他啶,頭孢吡肟,

6、氨曲南,阿米卡星,慶大霉素,環(huán)丙沙星,哌拉西林/他唑巴坦,多粘菌素B,亞胺培南,頭孢哌酮/舒巴坦,替加環(huán)素。選取耐亞胺培南的多耐藥鮑曼不動桿菌20株,采用PCR及序列分析的方法分析碳青霉烯酶基因(IMP、VIM、SIM、SPM、GIM、AIM、NDM、OXA-20、OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58),膜孔道蛋白基因(CarO),化合物外排泵基因(mdfA、smr-2)、可移動遺傳元件(tnpU、tnp513、ISa

7、ba1、ISaba4、ISaba9、qacEΔ1、intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3)。
　　 結(jié)果：⑴鮑曼不動桿菌標本來源為:痰液44份(84.6％),皮膚分泌物4份(7.7％),尿液2份(3.8％),血液1份(1.9％),膽汁1份(1.9％)。⑵病區(qū)分布:ICU15(28.8％),神經(jīng)外科13(25％),肝膽外科7(13.5％),胸外科4例(7.7％),胃腸外科3例(5.8％),骨科、神經(jīng)內(nèi)科、腎內(nèi)科各有2例,皮膚科、消化內(nèi)

8、科、呼吸內(nèi)科、介入科各有1例。⑶藥敏結(jié)果:鮑曼不動桿菌對多粘菌素B、亞胺培南、頭孢哌酮/舒巴坦、替加環(huán)素的耐藥率分別為7.7％、53.8％、57.7％、36.5％,敏感率82.7％、46.2％、21.2％、23.1％；對頭孢西丁、頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢吡肟、氨曲南、阿米卡星、慶大霉素、環(huán)丙沙星、哌拉西林/他唑巴坦等9種抗菌藥物耐藥率均大于75％。多耐藥菌是51株(98.1％),泛耐藥菌7株(13.5％),菌株77053是一株超級耐藥菌

9、,對所有檢測的藥物均耐藥。⑷選取多耐藥鮑曼不動桿菌20株,檢測化合物外排泵基因mdfA均為陽性,陽性率為100.0％,沒有檢出smr-2?？梢苿舆z傳元件基因tnpU、tnp513、ISaba1、intⅠ1、qacEΔ1均為陽性,陽性率為100.0％。沒有檢出ISaba4、ISaba9、intⅠ2、intⅠ3。⑸選取20株對亞胺培南耐藥的鮑曼不動桿菌,進行12種碳青霉烯酶基因檢測,有13株菌OXA-23群基因呈陽性,陽性率為65.0％,O

10、XA-20、OXA-24、OXA-51、OXA-58基因檢測均為陰性；金屬酶IMP、VIM、SIM、SPM、GIM、AIM、NDM,均未檢測出。外膜孔蛋白CarO基因檢測均陽性,陽性率為100.0％。
　　 結(jié)論：①鮑曼不動桿菌對頭孢菌素、氨基糖苷類、喹諾酮類均呈很高的耐藥率；碳青霉烯類藥物可考慮用于治療鮑曼不動桿菌感染；其次是頭孢哌酮/舒巴坦。②攜帶可移動遺傳元件,是耐藥基因互為傳播的主要因素,應引起重視。其中ISaba4、I