芝麻素協(xié)同吉西他濱對人肺腺癌A-549細胞株的影響.pdf

1、目的：觀察芝麻素（Sesamin）及聯(lián)合吉西他濱（Gemcitabine）作用于人肺腺癌A-549細胞株有何影響。
　　方法：選用人肺腺癌A-549細胞株進行體外培養(yǎng)，應(yīng)用MTT比色法測定芝麻素、吉西他濱及芝麻素聯(lián)合吉西他濱對人肺腺癌A-549細胞株的抗增殖作用。通過倒置顯微鏡和Hoechst33258熒光染色觀察芝麻素、吉西他濱及芝麻素聯(lián)合吉西他濱作用人肺腺癌A-549細胞株后細胞凋亡的形態(tài)學變化。應(yīng)用流式細胞術(shù)對芝麻素、吉西他

2、濱及芝麻素聯(lián)合吉西他濱作用人肺腺癌A-549細胞株的細胞凋亡進行定量分析及檢測細胞胞內(nèi)Ca2+濃度變化。利用免疫細胞化學染色于光學顯微鏡下觀察，人肺腺癌A-549細胞株caspase-3、8、9的表達。
　　結(jié)果：①MTT比色結(jié)果表明，低濃度的芝麻素對人肺腺癌A-549細胞株有一定的增殖抑制作用，各濃度組吉西他濱均具有抑制人肺腺癌A-549細胞株的作用，并隨著藥物濃度的增加呈現(xiàn)抑制率的增高趨勢，芝麻素聯(lián)合吉西他濱較單獨應(yīng)用吉西他濱

3、對A-549細胞株抑制率明顯增強，P<0.01，差異具有統(tǒng)計學意義；②倒置顯微鏡和Hoechst33258熒光染色進行形態(tài)學觀察，倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)芝麻素組、吉西他濱組和聯(lián)合組均可見到貼壁細胞數(shù)量較對照組明顯減少，細胞貼壁不牢、脫壁漂浮，部分細胞出現(xiàn)體積縮小、呈小圓球狀細胞，細胞間連接消失，并與周圍細胞發(fā)生脫離現(xiàn)象，可見到細胞碎片，失去原有腫瘤細胞多角形或梭形形態(tài)，腫瘤細胞生長受到抑制,且聯(lián)合組較吉西他濱組抑制腫瘤細胞形態(tài)學改變顯著，

4、Hoechst33258熒光染色后于熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)細胞核濃縮，細胞核染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化，其中芝麻素聯(lián)合吉西他濱較單用吉西他濱上述表現(xiàn)明顯；③流式細胞儀檢測細胞早期凋亡率結(jié)果顯示，藥物作用48小時后，芝麻素組、吉西他濱組及聯(lián)合組均較對照組早期凋亡率升高，且芝麻素聯(lián)合吉西他濱組較單用吉西他濱組早期凋亡率升高顯著（對照組3.75±0.10％，芝麻素組12.40±0.52%，吉西他濱組13.32±0.71%，聯(lián)合組26.59±0.76

5、%；芝麻素組和吉西他濱組分別與對照組比較，P<0.05；聯(lián)合組與對照組比較，P<0.01；芝麻素組與吉西他濱組比較，P=0.71；聯(lián)合組與吉西他濱組比較，P<0.01）；④通過流式細胞儀檢測細胞內(nèi)Ca2+濃度水平得知，藥物作用48小時后，芝麻素組、吉西他濱組及聯(lián)合組均較對照組細胞內(nèi)Ca2+濃度水平增高，且聯(lián)合組較吉西他濱組細胞內(nèi)Ca2+濃度水平增高顯著（對照組2.16±0.11，芝麻素組12.11±0.67，吉西他濱組15.46±0.9

6、7，聯(lián)合組54.72±3.56；芝麻素組和吉西他濱組分別與對照組比較，P＜0.05；聯(lián)合組與對照組比較，P<0.01；聯(lián)合組與吉西他濱組比較，P<0.01）；⑤免疫細胞化學染色發(fā)現(xiàn)，藥物作用48小時后，實驗組Caspase-3、8、9表達均較對照組升高，且聯(lián)合組較吉西他濱組Caspase-3、8、9表達升高顯著（Caspase-3表達，對照組8.31±0.49%，芝麻素組21.81±0.67%，吉西他濱組46.97±3.26%，聯(lián)合組6

7、1.48±1.04%，芝麻素組、吉西他濱組和聯(lián)合組分別與對照組比較，P<0.01，聯(lián)合組與吉西他濱組比較，P<0.01；Caspase-8表達，對照組6.56±0.76%，芝麻素組20.73±0.55%，吉西他濱組48.16±1.27%，聯(lián)合組57.72±1.19%，芝麻素組、吉西他濱組及聯(lián)合組分別與對照組比較，P＜0.01，聯(lián)合組與吉西他濱組比較，P<0.05；Caspase-9表達，對照組7.21±1.25%，芝麻素組24.73±1

8、.53%，吉西他濱組49.12±1.17%，聯(lián)合組59.45±0.93%，芝麻素組、吉西他濱組及聯(lián)合組分別與對照組比較，P＜0.01，聯(lián)合組與吉西他濱組比較，P<0.05）。
　　結(jié)論：（1）低濃度的芝麻素對人肺腺癌A-549細胞株有一定的增殖抑制作用；（2）芝麻素與吉西他濱聯(lián)合作用人肺腺癌A-549細胞株具有顯著的抑制率和協(xié)同抗惡性腫瘤細胞作用；（3）芝麻素可通過提高人肺腺癌A-549細胞株胞內(nèi)鈣離子濃度，且可增強吉西他濱提高人