SEPS1基因在內(nèi)毒素所致膿毒癥小鼠的變化規(guī)律及作用.pdf

1、目的：研究SEPS1基因在內(nèi)毒素所致膿毒癥小鼠的變化規(guī)律及其作用。 方法：研究分為兩部分。第一部分采用內(nèi)毒素攻擊小鼠膿毒癥模型研究SEPS1基因在內(nèi)毒素所致膿毒癥小鼠的變化規(guī)律。BALB/c小鼠，17￣20g。腹腔內(nèi)注射內(nèi)毒素10mg/Kg，84只小鼠隨機選取對照組動物10只，其余制作膿毒癥模型。正常對照組麻醉后活殺動物。腹腔注射內(nèi)毒素10mg/Kg復(fù)制膿毒癥模型后，分別于6h、12h、24h、48h、72h、96h留取肝臟、肺

2、臟標(biāo)本和血標(biāo)本，每個時間點隨機選取10只小鼠，檢測指標(biāo)包括血生化：血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)含量；肝組織細(xì)胞因子TNF-α、IL-6含量；肝組織SEPS1蛋白表達(dá)Western Blot檢測。第二部分研究siRNA沉默SEPS1基因后對內(nèi)毒素所致膿毒癥小鼠的臟器功能和細(xì)胞因子以及SEPS1蛋白表達(dá)的影響。3

3、0只小鼠隨機分為三組：H組(膿毒癥組，n=10)，K組(scrambled組，n=10)，L組(siRNA組，n=10)。實驗前12h K組經(jīng)小鼠尾靜脈注射scrambled RNA，L組經(jīng)小鼠尾靜脈注射SEPS1 siRNA。實驗當(dāng)天腹腔內(nèi)注射內(nèi)毒素10mg/Kg，連續(xù)觀察24h。分別于12h、24h留取血標(biāo)本和組織標(biāo)本，每個時間點5只動物。用于檢測血生化，細(xì)胞因子TNF-α、IL-6；核因子NF-kB，SEPS1蛋白表達(dá)Wester

4、n Blot檢測。每組中選取一個肺組織和肝組織進(jìn)行HE染色病理檢查和組織化學(xué)檢測。 結(jié)果：第一部分研究顯示膿毒癥小鼠心臟、肝臟和腎臟均有不同程度的損傷，表現(xiàn)為GPT、GOT、Cr、BUN及心肌酶CK-MB、CK和LDH含量升高。6h￣24h達(dá)到損傷高峰，與Oh比較有顯著差異(P＜0.05)。隨后逐漸下降，并于24h￣72h恢復(fù)至損傷前水平。細(xì)胞因子白介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子(TNF-α)水平明顯升高。0￣48h內(nèi)損傷持

5、續(xù)快速加重，IL-6和TNF-α均在6h達(dá)到高峰，與正常對照組0h比較差異顯著(P＜0.05)。Western Blot檢測膿毒癥小鼠肝組織SEPS1蛋白表達(dá)顯示，正常肝組織中有少量SEPS1蛋白表達(dá)，內(nèi)毒素攻擊導(dǎo)致膿毒癥小鼠肝臟SEPS1蛋白表達(dá)顯著升高，并于傷后第24h達(dá)峰值。隨后逐漸減弱，72h近乎恢復(fù)到正常水平。石蠟切片免疫組化研究結(jié)果顯示正常肝組織中有少量SEPS1蛋白表達(dá)。內(nèi)毒素攻擊致膿毒癥小鼠肝臟SEPS1蛋白表達(dá)逐漸增高

6、，并于傷后第24h達(dá)峰值。病理結(jié)果顯示膿毒癥小鼠的肝組織和肺組織明顯病變，6h￣12h細(xì)胞病變最嚴(yán)重。第二部分研究顯示，膿毒癥24h時GOT含量三組存在差異，L組(siRNA組)高于H組(膿毒癥組)。24h時L組BUN明顯高于其它兩組(P＜0.05)。心肌酶顯示L組(siRNA組)高于H組(膿毒癥組)。IL-6和TNF-α檢測結(jié)果顯示L組(siRNA組)高于H組(膿毒癥組)，尤其24h更顯著。NF-kB檢測結(jié)果顯示12h時L組(siRN

7、A組)活性高于K組(scrambled組)(P＜0.05)。Western Blot檢測顯示H組(膿毒癥組)動物12h時肝組織中有大量SEPS1蛋白表達(dá)，24h時有所減弱。K組(scrambled組)12h時和24h時表達(dá)無明顯差異。L組(siRNA組)12h時和24h時表達(dá)均較H組(膿毒癥組)減弱。石蠟切片免疫組化研究結(jié)果顯示，siRNA干擾膿毒癥小鼠后，三組相比較，K組SEPS1蛋白表達(dá)最強，L組和H組表達(dá)情況相似。組內(nèi)比較，各組2

8、4h時SEPS1蛋白表達(dá)均強于12h。石蠟切片HE染色結(jié)果顯示內(nèi)毒素攻擊致膿毒癥小鼠的肝、肺組織明顯病變。 結(jié)論：膿毒癥小鼠心臟、肝臟和腎臟均有不同程度的損傷，白介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子(TNF-α)水平明顯升高。肝臟SEPS1蛋白表達(dá)顯著升高，并于傷后第24h達(dá)峰值，與組化檢測表現(xiàn)一致。siRNA干擾致SEPS1基因沉默可引起膿毒癥小鼠臟器損害加重，炎性反應(yīng)增強，Selenoprotein S1蛋白表達(dá)水平下調(diào)。推測