新型鐵螯合劑CHGN2957對大鼠腎缺血再灌注損傷的保護作用.pdf

1、缺血性再灌注損傷(IRI)是缺血性急性腎功能衰竭的重要損傷環(huán)節(jié)，又是腎移植中不可避免的病理生理過程，不僅會引起移植腎功能延遲恢復(DGF)，而且使移植腎長期存活率明顯降低。腎IRI時，活性氧(ROS)的大量產(chǎn)生，超過機體清除能力，使體內還原物質被消耗，即可通過多種途徑直接損傷組織和誘導細胞凋亡。本研究采用CHGN2957是一種新型鐵螯合劑。早先的體外實驗表明其在調節(jié)鐵的傳遞，抑制ROS的信號途徑中扮演了重要角色，具有抑制ROS產(chǎn)生的作用

2、。本課題分為兩部分：第一部分建立大鼠急性腎熱IRI模型；第二部分采用CHGN2957對發(fā)生腎IRI大鼠進行干預實驗，以期探索其可能的腎保護作用。 第一部分：大鼠急性腎熱缺血再灌注損傷模型的建立　　目的：建立一個簡便、成功率高且穩(wěn)定的大鼠急性腎熱IRI模型。 方法：選用雄性SD大鼠36只，12～14周齡，體重240～260g。隨機分成6組，每組6只：假手術組(Sham組)、腎IRI30min組、40min組、50min組

3、、60min組、90min組。制作不同熱缺血時間大鼠急性單腎IRI模型。建模成功后觀察動物死亡率、體重變化，測定腎功能包括血清尿素氮、血清肌酐、尿24h肌酐，計算24h肌酐清除率并進行腎組織病理切片觀察。 結果：Sham組死亡率為0，各項腎功能指標正常。腎IRI30min組和40min組死亡率為0，術后第3天血、尿腎功能指標顯示輕度的急性腎功能不全，術后1周已基本恢復或接近正常水平。而腎IRI50min組及50min以上組，各項

4、腎功能指標明顯惡化，出現(xiàn)明顯的急性腎功能不全表現(xiàn)，且隨熱缺血時間的延長，腎功能障礙的程度逐漸加重，甚至出現(xiàn)多器官功能衰竭而死亡。50min組死亡率16.7％，60min組和90min組死亡率分別為50.0％、66.7％。病理顯示Sham組基本正常，而腎IRI各組存在不同程度的腎小管上皮細胞變性、壞死，其內可見細胞管型或蛋白管型，間質炎癥細胞浸潤，并隨腎IRI時間的延長，腎小管壞死的區(qū)域和程度加重。腎IRI90min組的腎小管壞死區(qū)域大于

5、80％，且有大量的出血。 小結：在成功的大鼠急性腎熱IRI模型中，腎缺血時間以50min為宜；少于50min，腎組織損害較輕，自行恢復較快；而大于50min，腎組織損害較重，往往不能恢復造成大鼠死亡，后兩者均不利于實驗結果的評價。因此，大鼠腎IRI50min模型是一個較為簡便、穩(wěn)定且成功率高的大鼠急性腎熱IRI模型，為進一步研究大鼠腎IRI的藥物干預提供了良好的實驗基礎。 第二部分：新型鐵螯合劑CHGN2957對大鼠腎I

6、RI的干預研究。 目的：采用新型鐵螯合劑CHGN2957對大鼠腎IRI進行干預，以期探索其在腎IRI急性期可能的腎保護作用，并為進一步發(fā)展此類化合物提供實踐支持。 方法：選用雄性SD大鼠90只，12～14周齡，體重240～260g。隨機分成5組，每組18只：假手術組(Sham組)、CHGN2957高劑量組(2.5mg/kg/d)、CHGN2957低劑量組(1.25mg/kg/d)、CHGN2957溶劑組(Vehicle)

7、和陽性對照組(IRFI01625mg/kg/d)。分別制作大鼠急性腎熱IRI50min模型。所有藥物干預均從手術前2天開始，直至手術后12天結束。固定每天上午9點經(jīng)腹腔內注射途徑一次給藥。建模成功后觀察動物存活率、體重變化；測定腎功能包括血清尿素氮、血清肌酐、尿24h肌酐，計算24h肌酐清除率；測定腎組織中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)還原酶活力和丙二醛(MDA)含量并進行腎組織病理切片觀察。 結果：動物死亡或處死

8、共17只，死亡率18.9％(17/90)。術后第3天，CHGN2957溶劑組的體重、各項血、尿。腎功能指標、SOD活力和GSH還原酶明顯差于其它各組，而MDA含量明顯高于其它各組。而隨著術后時間的延長，CHGN2957高、低劑量組和陽性對照組的體重均開始回升，腎功能指標逐漸接近基礎值或Sham組水平。病理切片顯示，術后第3天， Sham組的腎組織結構沒有明顯異常改變。腎IRI各組大鼠的腎小管上皮細胞變性壞死，間質充血水腫、炎癥細胞浸潤。

9、CHGN2957溶劑組的腎小管壞死區(qū)域和程度相對更重。病理評分顯示，CHGN溶劑組的腎小管損傷明顯重于其它各組；CHGN2957高劑量組與陽性對照組間，差異沒有統(tǒng)計學意義：CHGN2957低劑量組的腎小管損傷輕于CHGN2957溶劑組，但重于其它各組。 小結：進一步證明大鼠急性單腎熱IRI50min模型是一種簡便、穩(wěn)定、可靠的腎IRI動物模型，可提供給腎IRI研究使用。CHGN2957作為一種新型鐵螯合劑，高劑量組(2.5mg/