TK+-TK-豬偽狂犬病活疫苗對非靶動物——小鼠的安全性研究.pdf

1、偽狂犬病(Pesudorabies，PR)是由偽狂犬病毒(Pesudorabies Viurs，PRV)所引起的一種急生烈性傳染病，又稱奧葉茲基氏病(Aujeszkyps Disease，AD)。屬于高度致死性疾病，主要癥狀包括奇癢、發(fā)熱和腦脊髓炎。感染譜極廣，可感染如豬、馬、牛、羊、犬、貓、鼠及多種野生動物。本病的主要宿主和傳染源是豬，健康豬與患病豬或帶毒豬直接接觸后可感染本病。疫苗接種是防治和根除PR的主要措施，經(jīng)典的Bartha株

2、弱毒活疫苗在偽狂犬病的防控和根除中發(fā)揮了重要的作用。目前防控偽狂犬病的活疫苗對豬是安全的，但是對其它種屬動物可能是致病的。國內(nèi)豬場的環(huán)境比較復雜，常有鼠患，豬的下腳料以及相關(guān)廢棄料不能保證不被周圍的犬、貓及鼠等吃到，如果這些活疫苗對非靶動物是致病的，就有可能造成犬、貓及鼠的感染，存在一定的生物安全風險。為了檢驗偽狂犬病活疫苗對其它種屬動物的安全性，本實驗以BALB/c小鼠作為實驗對象，評價了商品化的Bartha疫苗株、HB-98疫苗株及

3、本實驗室構(gòu)建的缺失TK基因的Bartha-TK-毒株對小鼠的安全性;并將這些疫苗株在小鼠上連續(xù)傳代后再感染豬，研究是否會對豬產(chǎn)生致病性，來初步評估現(xiàn)有的TK+/TK-豬偽狂犬病活疫苗使用的生物安全風險。
　　本研究測定了豬偽狂犬病活疫苗Bartha、HB-98及Bartha-TK-在PK-15和NRK細胞上的一步生長曲線，結(jié)果顯示在PK-15細胞上Bartha株增殖最快，在20h以后，HB-98株的滴度明顯低于另兩種疫苗株;在NR

4、K細胞上HB-98株增殖最快、滴度最高，Bartha-TK-在24h以后才開始有增殖，而且滴度最低。比較了三種疫苗株分別在兩種細胞上的空斑形態(tài)，結(jié)果顯示三種疫苗株在兩種細胞上形成的空斑犬小都不均一，PK-15細胞上三種疫苗株的最大空斑直徑大小基本相同，NRK細胞上HB-98株的空斑明顯比另兩種疫苗株的大。
　　本研究進行了豬偽狂犬病活疫苗Bartha、HB-98及Bartha-TK-在小鼠上的安全性評價試驗，接種小鼠，研究豬偽狂犬

5、病活疫苗對小鼠的安全性;在小鼠上連續(xù)傳五代，最后將第五代感染小鼠的腦組織混懸液上清接種2劇齡的仔豬，研究豬偽狂犬病活疫苗在小鼠上連續(xù)傳五代后再感染豬致病性是否會增強。結(jié)果顯示Bartha-TK-和HB-98株對小鼠安全，而Bartha株對小鼠不安全;Bartha-TK-和HB-98株在小鼠上傳代一次后檢測不到PRV，因此沒有繼續(xù)進行在小鼠體內(nèi)的傳代實驗，Bartha株在小鼠上傳了五代后再接種仔豬，結(jié)果顯示仔豬沒有明顯的臨床癥狀，說明通過