豬偽狂犬病gE基因缺失滅活疫苗(HNX-2012株)的交叉保護(hù)試驗(yàn)及保存期試驗(yàn).pdf

1、偽狂犬?。≒seudorabies，PR又稱為Aujeszky’s disease，AD）是一種由偽狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV）感染引起的多種家畜和野生動物共患的急性、熱性傳染病，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。在歐美國家，通過使用標(biāo)記疫苗和相應(yīng)的鑒別診斷方法，控制和根除了該病。本實(shí)驗(yàn)室于上世紀(jì)90年代分離鑒定了偽狂犬病毒Ea株，通過基因工程改造研制了基因標(biāo)記活疫苗（HB-98株），并應(yīng)用于臨床，很好地控制了該病

2、。但2011年下半年以來，在我國多個地區(qū)的免疫豬群中，爆發(fā)了偽狂犬病新疫情。研究表明為偽狂犬病毒變異株引起，現(xiàn)有偽狂犬疫苗對變異株不能提供完全的免疫保護(hù)。本實(shí)驗(yàn)室于2012年從發(fā)生偽狂犬病的豬場分離到一株偽狂犬病毒變異株，命名為HNX株，構(gòu)建了gE基因缺失株，以此毒株研制了gE基因缺失滅活疫苗（HNX-2012株），并進(jìn)行了安全性評價(jià)和免疫效力的測定。為了評價(jià)該滅活疫苗對流行毒株和早期分離株（Ea株）的交叉保護(hù)力及其保存期，本論文開展了

3、以下三方面研究。
　　1.疫苗交叉保護(hù)試驗(yàn)。PRV抗體陰性豬25頭，分為3組。免疫攻毒組用滅活疫苗（HNX-2012株）兩次免疫后，分別滴鼻接種107TCID50劑量的PRV Ea株和HNX株；同時，不免疫攻毒組分別滴鼻接種107TCID50劑量的PRV Ea株和HNX株；空白組豬常規(guī)飼養(yǎng)，不免疫不攻毒。結(jié)果顯示，免疫滅活疫苗（HNX-2012株）后攻毒HNX株和Ea株均未出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，存活率達(dá)100％（6/6），剖

4、檢后無明顯病理變化。而不免疫攻毒組中，用HNX株攻毒的豬只出現(xiàn)嚴(yán)重的呼吸系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，死亡率60%（3/5），剖檢后發(fā)現(xiàn)腦明顯充血，肺大量出血；用Ea株攻毒后，該組豬只死亡率0%（0/5），但剖檢后發(fā)現(xiàn)肺有少量出血，肺間質(zhì)明顯增寬。這表明該疫苗對親本毒株 HNX株和Ea株均有良好的免疫保護(hù)力。
　　2.建立小鼠模型評價(jià)疫苗效力。以小鼠為試驗(yàn)動物進(jìn)行交叉保護(hù)試驗(yàn)，選取PRV抗體陰性Balb/C小鼠50只，分為3組。免疫攻毒組用

5、gE基因缺失滅活疫苗（HNX-2012株）兩次免疫后，分別足底注射接種5×103TCID50劑量的PRV Ea株和HNX株，不免疫攻毒組分別滴鼻接種同樣劑量的PRV Ea株和HNX株，空白組小鼠常規(guī)飼養(yǎng)，不免疫不攻毒。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，免疫的Balb/C小鼠獲得針對Ea株和HNX株的保護(hù)力均為100%，用PCR檢測攻毒后28d腦組織，未檢測到 PRV，而未免疫小鼠攻毒Ea株和HNX株后死亡率均為100%。將小鼠與仔豬兩者的免疫保護(hù)相關(guān)參數(shù)進(jìn)行相

6、關(guān)性分析，結(jié)果顯示，小鼠與仔豬兩者的免疫后gB抗體水平顯著相關(guān)，而中和抗體水平極顯著相關(guān)；這些結(jié)果表明，小鼠模型可以用于評估PRV gE基因缺失滅活疫苗（HNX-2012株）的免疫效力。
　　3.疫苗保存期試驗(yàn)。將2批PRV gE基因缺失滅活疫苗（HNX-2012株），置于4℃保存，于保存3、6、9、12、15個月時，用疫苗免疫小鼠后進(jìn)行攻毒保護(hù)試驗(yàn)，結(jié)果顯示，所有保存時間疫苗在小鼠第二次免疫后2周，gB ELISA抗體平均S/N