豬偽狂犬病毒新流行毒株抗原變異與滅活疫苗體液免疫特性研究.pdf

1、偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)屬于皰疹病毒科α-皰疹病毒亞科，是一種有囊膜的雙鏈DNA病毒，可感染牛、羊、狗、貓、山羊、雞、浣熊及野生動物等，豬是偽狂犬病毒的天然宿主。偽狂犬病主要引起新生仔豬的神經(jīng)癥狀和死亡，以及妊娠母豬流產(chǎn)、死胎，在豬群中常呈爆發(fā)流行，對我國乃至全世界的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大損失。2011年以來，我國很多PRV疫苗免疫的規(guī)模化豬場爆發(fā)偽狂犬病疫情。
　　2011年底，浙江某規(guī)模豬場免疫豬

2、群爆發(fā)疫情，本實(shí)驗(yàn)室從疑似偽狂犬病的仔豬腦組織病料中分離獲得PRV ZJ-01株。本文對PRV新分離毒株ZJ-01的中和抗原特性進(jìn)行分析鑒定，并對PRV滅活疫苗進(jìn)行了初步研究。具體研究內(nèi)容如下:
　　1.偽狂犬病毒新流行毒株中爭抗原特性
　　為了進(jìn)一步了解PRV毒株ZJ-01是否存在抗原變異，我們選擇不同商品化PRV活疫苗（Bartha-K61、Bucharest和HB-98株）免疫的3個(gè)規(guī)模化豬場健康豬群，分別采集9-11

3、份仔豬血清，采用PRV gB和gE ELISA抗體試劑盒(IDEXX公司)檢測抗體，結(jié)果為:gB抗體均為陽性，gE抗體均為陰性。采用PRV新流行毒株ZJ-01株和傳統(tǒng)的PRV LA毒株分別進(jìn)行血清中和抗體測定，結(jié)果顯示，3個(gè)毒株活疫苗免疫血清與ZJ-01株中和抗體效價(jià)明顯低于其與LA株中和抗體效價(jià)。同時(shí)，ZJ-01株抗血清10份與ZJ-01株和LA株的中和抗體效價(jià)相似，計(jì)算出其變異系數(shù)R值為0.255～0.378，證明該豬場流行的PRV

4、毒株抗原性發(fā)生明顯變異，從而為控制該病的傳播和蔓延及新型疫苗研制奠定了理論基礎(chǔ)。
　　2.偽狂犬病毒滅活疫苗制備與小鼠體液免疫特性
　　本研究采用甲醛和過氧化氫兩種滅活劑對重組偽狂犬病毒毒株（rZJ-011G）分別進(jìn)行滅活處理，篩選出滅活條件為:0.1％甲醛37℃處理12h和14h;1％過氧化氫4℃滅活處理4h和5h。將滅活病毒液與CPH水性佐劑混合制成滅活疫苗，取6～8周齡ICR清潔級小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，第1～4

5、組分別接種上述4種滅活疫苗，0.2ml/只，第5組皮下注射DMEM營養(yǎng)液作為陰性對照，間隔3周后用相同方法加強(qiáng)免疫一次，隔離飼養(yǎng)觀察。首免后第3、6周分別采血，檢測PRV ELISA抗體水平，第6周檢測其中和抗體水平。結(jié)果為:首免后3周，4個(gè)疫苗組即可檢測到ELISA抗體，加強(qiáng)免疫后ELISA抗體平均達(dá)1∶17000;0.1％甲醛12h滅活疫苗組中和抗體平均為1∶8，而過氧化氫滅活疫苗組無明顯中和抗體，表明PRV甲醛滅活效果優(yōu)于過氧化氫