偽狂犬病毒變異株與經(jīng)典株滴鼻感染小鼠后時(shí)空分布規(guī)律的研究.pdf

1、近年來(lái)，偽狂犬病毒(Pseudorabies Virus，PRV)變異株的出現(xiàn)導(dǎo)致原有病毒疫苗的保護(hù)力下降，國(guó)內(nèi)豬場(chǎng)偽狂犬病不斷爆發(fā)，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究以PRV變異株（LY-2015）與經(jīng)典株(Halv)為研究對(duì)象，滴鼻感染成年健康昆明鼠。通過(guò)免疫組織化學(xué)染色、原位雜交染色、PCR技術(shù)結(jié)合組織病理學(xué)技術(shù)，研究病毒在小鼠腦內(nèi)的分布。同時(shí)通過(guò)不同時(shí)間點(diǎn)小鼠腦內(nèi)病毒的分布差異分析PRV滴鼻感染小鼠后的上行傳導(dǎo)通路，以填補(bǔ)變異

2、株P(guān)RV感染小鼠后病毒在腦內(nèi)分布相關(guān)研究的空白，并為臨床上PRV的診斷與精確的阻斷病毒傳播提供基礎(chǔ)資料。論文主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　1病毒感染小鼠后的臨床癥狀
　　在2，000TCID50的LY-2015株P(guān)RV感染組，小鼠在病毒感染48h后開(kāi)始出現(xiàn)被毛粗亂、食欲不振;在病毒感染60h后，小鼠表現(xiàn)出精神振奮，抓撓頭面部皮膚;病毒感染84h后，多數(shù)小鼠因瘙癢抓撓致皮膚破潰，小鼠死亡。用相同感染量的Halv株P(guān)RV滴鼻感染小鼠時(shí)

3、，未見(jiàn)任何臨床癥狀。在10，000TCID50的Halv株P(guān)RV感染組，小鼠在病毒感染72h后開(kāi)始出現(xiàn)與LY-2015株P(guān)RV感染組相似的臨床癥狀;在病毒感染96h后，大量小鼠死亡。結(jié)果表明LY-2015株P(guān)RV毒力較Halv株P(guān)RV強(qiáng)。
　　2病毒感染后的上行傳導(dǎo)通路
　　LY-2015株P(guān)RV感染小鼠后，病毒首先出現(xiàn)在鼻黏膜下層細(xì)胞內(nèi)，然后在三叉神經(jīng)相關(guān)神經(jīng)核團(tuán)、交感神經(jīng)相關(guān)神經(jīng)核團(tuán)、面神經(jīng)相關(guān)神經(jīng)核團(tuán)內(nèi)均檢測(cè)到PRV。

4、表明變異病毒LY-2015株P(guān)RV滴鼻感染小鼠后可沿三叉神經(jīng)、交感神經(jīng)與面神經(jīng)通路上行傳導(dǎo)，致中樞感染。Halv株P(guān)RV滴鼻感染小鼠后，在三又神經(jīng)相關(guān)核團(tuán)、交感神經(jīng)相關(guān)核團(tuán)、副交感神經(jīng)相關(guān)核團(tuán)與面神經(jīng)相關(guān)核團(tuán)內(nèi)檢測(cè)到PRV。說(shuō)明經(jīng)典病毒Halv株P(guān)RV滴鼻感染小鼠后可沿三叉神經(jīng)、交感神經(jīng)、副交感神經(jīng)和面神經(jīng)上行傳導(dǎo)。
　　3病毒感染小鼠后在腦內(nèi)的分布
　　2，000TCID50的LY-2015株P(guān)RV感染小鼠后，病毒多分布于

5、脊髓，腦橋和延髓，大腦內(nèi)僅在丘腦可見(jiàn)少量病毒。在病毒感染84h后，小鼠腦內(nèi)的病毒分布最為廣泛。10，000TCID50的Halv株P(guān)RV感染組，病毒不僅分布于脊髓、腦橋和延髓，大腦中也存在多量病毒。病毒感染小鼠96h后在腦內(nèi)的分布最為廣泛。結(jié)果表明，經(jīng)典病毒Halv株P(guān)RV感染小鼠后沿軸突上行傳導(dǎo)較變異病毒LY-2015株P(guān)RV慢;且LY-2015株P(guān)RV的毒力較強(qiáng)，小鼠在病毒感染后過(guò)早死亡，僅少量病毒傳導(dǎo)至中樞，分布于下丘腦外側(cè)部、丘

6、腦下中間核腹側(cè)部等。
　　此外，在2，000TCID50的LY-2015株P(guān)RV感染組，小鼠在病毒感染后120h，IHC染色呈PRV陰性，但I(xiàn)SH染色呈PRV陽(yáng)性，結(jié)果表明小鼠腦內(nèi)存在病毒基因，但病毒未復(fù)制。結(jié)果表明，感染PRV后，耐過(guò)小鼠呈隱性感染，病毒基因整合于小鼠外周神經(jīng)細(xì)胞核內(nèi)，但不復(fù)制產(chǎn)生新的病毒病毒粒子。
　　以上結(jié)果表明，LY-2015株P(guān)RV毒力強(qiáng)于Halv株P(guān)RV;Halv株P(guān)RV只有在高病毒滴度下才能造成