茶黃素和EGCG與抗壞血酸協(xié)同誘導癌細胞凋亡機理研究.pdf

1、多酚類的抗氧化作用被認為是茶葉防癌和抗癌最重要的作用機理。大量的生物體外、生物體內研究和流行病學調查等都證實綠茶兒茶素具有良好的抗氧化功效。紅茶在世界上茶葉消費量中占78％,茶黃素由綠茶多酚氧化聚合而來,是紅茶的品質元素。所以近年來茶黃素的研究成為茶葉研究的熱點。本研究采用體外和細胞實驗評估了EGCG和TF3的抗氧化活性,研究了EGCG和TF3與維生素C對癌癥細胞的聯(lián)合作用效果并從MAPK途徑入手進行了機理的探討。
　　 主要研

2、究結果如下:
　　 1.對茶黃素單體(TF1、TF2A、TF2B和TF3)清除超氧陰離子自由基、單線態(tài)氧自由基、過氧化氫、羥自由基和DPPH自由基的能力進行了研究,以EGCG為對照.結果表明,對超氧陰離子自由基的清除能力為:TF1>TF2B>TF2A>TF3>EGCG；對單線態(tài)氧自由基的清除作用能力為:TF2B>TF1>TF3>TF2A>EGCG；對過氧化氫的清除作用為:TF2B=TF3>TF2A>TF1>EGCG；對羥自由基的

3、清除能力為:TF3>TF2B>TT2A>EGCG>TF1；對DPPH自由基的清除作用為:TF3≈EGCG>TF2A≈F2B>TF1。
　　 2.利用AM1法計算茶葉兒茶素的HOF值,并通過對物質構效關系和實驗結果加以相互印證,提出了以HOF值來預測和表征茶葉中多酚類抗氧化能力的方法。對兒茶素的評估結果顯示EC、EGC、ECG和EGCG的HOF值分別為-213.58、-252.96、-322.44和-383.99,HOF值越低其抗

4、氧化性越強,與實驗所得結果4種兒茶素的抗氧化活性的強弱順序相符合:EGCG>ECG>EGC>EC。TF1、TF3,EGCG和維生素C的HOF分別為-389.35、-654.13、-383.99和-232.18,從此可以看出抗氧化性最好的是TF3,另外TT1的抗氧化性可與EGCG媲美。
　　 3.采用Chou氏公式評估了EGCG和維生素C、TF3和維生素C的聯(lián)合抑制肺癌細胞的生長作用。結果表明,維生素C和TF3以1:10比率可以對

5、肺癌A549細胞產生拮抗作用和協(xié)同作用,在低抑制率時顯示拮抗作用,當抑制率大于82.51％時顯示協(xié)同。維生素C與EGCG的聯(lián)合作用更為復雜,呈現(xiàn)波浪形效果,聯(lián)合抑制率小于49.8％時和抑制率大于80.3％時CI值呈現(xiàn)下降的趨勢。在協(xié)同抑制率為32.0％和65.6％之間時兩者為協(xié)同關系。維生素C與TF3、維生素C與EGCG以6:1的比率聯(lián)合抑制SPC-A-1細胞,分別當聯(lián)合抑制率大于54.4％和45.5％時分別顯示協(xié)同效果.藥物處理SPC

6、-A—1細胞后G0／G1期的阻滯增加,其中TF3處理處于G0／G1期的最高,達到65.3％。處理TF3+Vc和EGCG+Vc后G0／G1期由53.9％分別增加到了62.8％和60.0％.其中TF3+Vc這一處理把S期由46.1％減少到23.8％,細胞的凋亡率由1.0％增加到了22.3％。說明TF3和Vc聯(lián)合對SPC-A-1癌細胞是從引起細胞周期阻滯和誘導凋亡兩方面作用的。
　　 4.在對細胞信號通路的研究中發(fā)現(xiàn),TF3+Vc對S

7、PC-A-1細胞中的caspase3的活性為TF3單獨使用時caspase3活性的1.64倍；ECA-109細胞中EGCG+Vc處理的caspase3的活性顯著高于EGCG單獨使用時caspase3的活性,高達3.29倍；SPC-A-1細胞的caspase9活性檢測結果顯示,EGCG+Vc處理后caspase9的活性為EGCG單獨作用時的活性的2.90倍；EGCG+Vc處理和TF3+Vc處理后的ECA-109細胞caspase9活性分別