蜂毒素通過(guò)調(diào)節(jié)HMGB1及其相關(guān)信號(hào)通路抑制人肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、一、研究目的:
　　 1、觀察蜂毒素對(duì)肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制效應(yīng)；
　　 2、觀察蜂毒素對(duì)肝癌細(xì)胞的周期阻滯效應(yīng)；
　　 3、探索蜂毒素對(duì)肝癌細(xì)胞中HMGB1相關(guān)信號(hào)通路的影響。
　　 二、研究方法:
　　 1、通過(guò)MTT法，研究不同時(shí)間及濃度蜂毒素，對(duì)人肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用；
　　 2、通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)蜂毒素誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞周期阻滯效應(yīng)及其劑量關(guān)系；
　　 3、通過(guò)Westernb

2、lotting，檢測(cè)蜂毒素對(duì)人肝癌細(xì)胞中HMGB1、VEGF-C及VEGF-D蛋白表達(dá)的影響；
　　 4、通過(guò)qRT-PCR，檢測(cè)蜂毒素對(duì)人肝癌細(xì)胞中HMGB1、VEGF-C及VEGF-DmRNA表達(dá)的影響。
　　 三、研究結(jié)果:
　　 (一)MTT法觀察到蜂毒素對(duì)多種肝癌細(xì)胞(MHCC97H、QGY-7701、BEL-7402、HepG2、SMMC-7721)的生長(zhǎng)具有抑制作用。當(dāng)作用時(shí)間為24h，藥物濃度為4

3、μg/mL時(shí)，五種人肝癌細(xì)胞的存活率均小于60％，而藥物濃度為8μg/mL時(shí)，存活率均小于10％；當(dāng)作用時(shí)間為48h、72h，藥物濃度為2μg/mL時(shí)，人肝癌細(xì)胞HepG2存活率小于10％。
　　 (二)流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)，蜂毒素能夠誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞HepG2阻滯于S期，當(dāng)作用時(shí)間為24h，藥物濃度為4μg/mL時(shí)，細(xì)胞S期比例明顯上升。
　　 (三)Westernblotting檢測(cè)，不同濃度蜂毒素作用細(xì)胞24h，以及4

4、μg/mL蜂毒素作用細(xì)胞0h、15min、30min、1h、2h后，均可抑制HMGB1的蛋白表達(dá)。
　　 (四)qRT-PCR檢測(cè)，不同濃度蜂毒素作用人肝癌細(xì)胞HepG224h后，以及4μg/mL蜂毒素作用細(xì)胞0h、15min、30min、1h、2h后，均可抑制HMGB1、VEGF-C及VEGF-D的mRNAs表達(dá)。
　　 四、結(jié)論:
　　 蜂毒素可抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)，阻滯細(xì)胞周期于S期，并可能通過(guò)抑制HMGB1、