siRNA下調NRP-1表達對人腦膠質瘤細胞系U373MG細胞生長和MAPK信號通路的影響.pdf

1、siRNA下調NRP1表達對人腦膠質瘤細胞系U373MG細胞生長和MAPK信號通路的影響TheinfluenceofsiRNAinterferingNRP1geneexpressiononU373MGhumangliomacellgrowthMAPKsignalingpathways碩士研究生：李祥云導師：黃延焱副教授導師小組成員：周厚廣副教授盧曉喆主治醫(yī)師復旦大學附屬華山醫(yī)院2012年4月老年科碩士學位論文中文摘要siRNA下調NRP

2、1表達對人腦膠質瘤細胞系U373MG細胞生長和MAPK信號通路的影響中文摘要研究背景膠質瘤是最常見的顱內腫瘤，其惡性程度高，侵襲性強，術后易復發(fā)，是最棘手的難治性腫瘤之一。高度惡性的多形性膠質母細胞瘤患者的1年和2年生存率分別為58%和31%。對膠質瘤發(fā)病機制的研究和尋找新的治療紀點是膠質瘤研究領域亟待解決的基本問題。神經菌毛素l(Neuropilinl，NRPl)是細胞膜表面的一種單向跨膜糖蛋白，主要表達在血管內皮細胞、腫瘤細胞及神經

3、細胞等，屬于非酪氨酸激酶輔助受體。在人類多種腫瘤組織中，NRP1均有過度表達的現(xiàn)象，對相關腫瘤的發(fā)生發(fā)展起著重要促進作用。研究發(fā)現(xiàn)，腦膠質瘤患者的病理標本中，NRP1亦呈現(xiàn)高表達，且與膠質瘤的惡性程度及患者預后密切相關。目前NRP1在腦膠質瘤發(fā)生發(fā)展中的作甩及其分子機制尚未完全明確阻礙了膠質瘤的分子機制研究及以NRP1作為干預靶點探索膠質瘤治療新方法的進程。絲裂原活化蛋白激酶（MitogenactivatedproteinkinaseM

4、APK)通路是經典的細胞信號轉導途徑，具有調節(jié)細胞增殖、分化、存活、轉化及凋亡等多重功能，與膠質瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵潤、轉移及預后等相關密切。而NRP1對腦膠質瘤的影響是否與MAPK信號通路有關，目前國內外尚未見相關報道。第一部分NRP1在腦膠質瘤細胞系中的表達及髙效NRP1siRNA序列的設計、合成和蹄選目的觀察NRP1蛋白在不同膠質母細胞瘤細胞系的表達情況，選取NRP1呈現(xiàn)較高表達的細胞系用于本實驗，以及設計、合成和篩選高效NRP1s

5、iRNA序列。材料和方法1.運用Westernblot(蛋白免疫印跡法）檢測惡性膠質瘤細胞系LN319、U373MG、U87MG、U118MG和U251MG中NRP1蛋白的表達情況。2.訂購Ambion公司化學合成的siRNA|C向NRP1基因的兩個目標序列分別為：NRP1siRNAl5AAGCTCTGGGCATGGAATCAG3；NRP1siRNA25，AAAGCCCCGGGTACCTTACAT3，。將U373MG細胞（Western