靶向NRP-1基因的siRNA對(duì)Hep-2細(xì)胞增殖及mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、背景和目的
　　 喉癌是喉部最常見惡性腫瘤,其發(fā)病率目前有明顯增長趨勢(shì)。20世紀(jì)80年代以來,通過手術(shù)、放、化療和免疫治療的聯(lián)合應(yīng)用,大大提高了喉癌患者的5年生存率。但手術(shù)、放療和化療并發(fā)癥多、毒副作用大,且嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,手術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍是喉癌患者的主要致死因?yàn)?。因此尋找新的有效、簡便的治療方法成為耳鼻咽喉科工作者關(guān)注的焦點(diǎn)。RNA干擾(RNA interference,RNAi)技術(shù)是近年來發(fā)展起來的分子生物學(xué)領(lǐng)域

2、一個(gè)新技術(shù).本研究以Hep-2細(xì)胞株中NRP-1基因作為研究靶點(diǎn),運(yùn)用RNA干擾技術(shù)阻斷基因表達(dá)后觀察其對(duì)Hep-2細(xì)胞增殖、mRNA表達(dá)的影響。
　　 方法：
　　 根據(jù)siRNA靶序列設(shè)計(jì)原則,設(shè)計(jì)并合成出NRP-1基因3個(gè)位點(diǎn)的干擾序列,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染Hep-2細(xì)胞,分別從形態(tài)學(xué)及應(yīng)用MTT,RT-PCR方法檢測(cè)其干擾效果。采用SPSS13.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,計(jì)量資料以(x)±s表示,多組間比較采用方差

3、分析,用LSD-t檢驗(yàn)法進(jìn)行組間兩兩比較,判定標(biāo)準(zhǔn):P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.形態(tài)學(xué)檢測(cè):轉(zhuǎn)染組細(xì)胞可見皺縮、變圓,部分脫落,尤以744位點(diǎn)組較明顯；
　　 2.MTT結(jié)果顯示靶向NRP-1基因744位點(diǎn)的siRNA轉(zhuǎn)染Hep-2細(xì)胞后,細(xì)胞增殖活性受抑制情況與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；
　　 3.RT-PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,與對(duì)照組相比,干擾組744位