腎損傷分子1診斷肝臟缺血-再灌注后急性腎損傷的初步實驗觀察與臨床研究.pdf

1、目的：肝臟手術(shù)(如肝移植術(shù)、部分肝切除術(shù)等)多經(jīng)歷肝臟缺血-再灌注(I/R)損傷過程，I/R不僅造成肝臟本身損傷，還可引起全身其他臟器損傷(如腎臟、肺臟、心臟等)。本實驗將探討：KIM-1在大鼠肝臟I/R后腎損傷模型中腎臟的表達；肝移植患者尿液中KIM-1水平變化對術(shù)后早期急性腎損傷的診斷意義；結(jié)合基礎(chǔ)與臨床實驗結(jié)果初步探討影響肝移植術(shù)后腎損傷的相關(guān)因素。
　　方法：本課題分為兩部分：第一部分基礎(chǔ)實驗，選取220-240g雄性SD

2、大鼠26只，其中實驗組24只、對照組2只。按肝臟血流阻斷時間不同將實驗組分為A組(10min)、B組(20min)、C組(30min)，根據(jù)術(shù)后肝臟再灌注時間不同將A組分為A1(2h)、A2(6h)、A3(12h)、A4(24h)四個亞組，B、C兩組分亞組方法如A組。建立大鼠肝臟I/R后腎損傷模型。將各組按肝臟再灌注時間不同處死大鼠，取腎臟組織；經(jīng)10％福爾馬林固定、脫水、透明、浸蠟制成蠟塊，切片(4μm)，HE染色、抗大鼠KIM-1免

3、疫組化染色；顯微鏡下計數(shù)腎小管KIM-1陽性染色個數(shù)。第二部分臨床實驗，以2010年8月至2011年10月在天津第一中心醫(yī)院移植外科接受經(jīng)典非轉(zhuǎn)流肝移植術(shù)的患者為研究對象，共50例。留取患者術(shù)前、門靜脈開放后0h、2h、6h、12h、24h尿液各5ml；取其術(shù)前及門靜脈開放后12h、24h、48h、72h、96h外周靜脈血5ml抗凝。用苦味酸化學發(fā)光法檢測血肌酐(SCr)、尿肌酐(UCr)，用ELISA法檢測尿液KIM-1水平。根據(jù)急性

4、腎損傷協(xié)作組(AKIN)標準確定AKI病例。研究對象分為AKI組與非AKI組，于設(shè)定時點觀察兩組患者尿液KIM-1和SCr水平變化。采用t檢驗、重復方差分析等統(tǒng)計方法，分析確定兩組間術(shù)前、術(shù)中的顯著差異性因素；運用受試者工作特征曲線(ROC)及曲線下面積(AUC)等方法，評價尿液KIM-1檢測對肝移植術(shù)后AKI的診斷價值。
　　結(jié)果：第一部分：大鼠肝臟I/R后腎損傷模型對照組與實驗組大鼠24h存活率100%，模型穩(wěn)定可用于相關(guān)研究

5、。對照組：腎臟HE染色鏡下可見腎組織內(nèi)腎小球均勻分布，腎小管結(jié)構(gòu)清晰可見；抗大鼠KIM-1免疫組化染色未見特異性KIM-1陽性染色。實驗組：HE染色鏡下可見腎間質(zhì)瘀血，腎小球旁器炎細胞浸潤、損傷，腎小管周圍炎細胞浸潤，腎小管上皮水腫、腎小球萎縮；抗大鼠KIM-1免疫組化染色鏡下見肝臟I/R后腎臟組織內(nèi)，腎小管上皮KIM-1陽性染色；100倍鏡下計數(shù)10個腎小球單位周圍腎小管KIM-1陽性染色個數(shù)，總數(shù)/10＝單個腎小球周圍腎小管KIM-

6、1陽性染色個數(shù)，觀察發(fā)現(xiàn)隨著肝臟缺血時間或再灌注時間的延長，腎小管KIM-1陽性染色個數(shù)增多，即肝臟缺血30min-再灌注24h組大鼠腎小管KIM-1陽性染色個數(shù)最多達10.1個/單個腎小球。第二部分：50例患者中27例發(fā)生了肝移植術(shù)后AKI，發(fā)病率為54%。兩組患者年齡、性別、術(shù)前SCr，術(shù)中輸血量、失血量、尿量及手術(shù)時間均無統(tǒng)計學差異；而AKI組術(shù)前MELD評分，術(shù)中無肝期時間、無尿時間均較非AKI組明顯升高或延長，P<0.05有統(tǒng)

7、計學差異。MELD評分與無尿時間相關(guān)系數(shù)：0.39，P<0.01。無肝期時間與無尿時間相關(guān)系數(shù)為：0.71，P<0.01。術(shù)后24hAKI組SCr明顯高于非AKI組，具有統(tǒng)計學差異，但隨后兩組SCr逐漸降至術(shù)前水平。而尿液KIM-1在AKI組門脈開放后2h達到高峰，與非AKI組比較有統(tǒng)計學差異，且這種差異一直持續(xù)至門脈開放后12h。以AKIN標準為金標準時，ROCAUC結(jié)果表明：取門脈開放后2h尿液KIM-1:14.2ngg-1Ucr作