TGF-β1在低氧誘導肺血管內皮向平滑肌樣細胞轉分化中的作用.pdf

1、目的：研究低氧條件下肺動脈內皮細胞(PAEC)向平滑肌樣細胞的轉分化及轉化生長因子β1(TGFβ1)在此轉分化過程中的作用。 方法：1.胰酶消化法獲取豬肺動脈內皮細胞，并用免疫磁珠法(以PECAM-1/CD31陽性表達作為分選標記)對原代肺動脈內皮細胞進行純化； 2.形態(tài)學觀察結合免疫組化檢測Ⅷ因子和CD31對內皮細胞進行鑒定； 3.實驗分組： 將純化后的PAEC分成四組：(1)常氧組(N)(含21％O2

2、，5％CO2和74％N2)；(2)低氧組(H)(含1％O2，5％CO2，94％N2)；(3)常氧+TGFβ1抑制組(N+TGFβ1NeutralizingAbs)；(4)低氧+TGFβ1抑制組(H+TGFβ1NeutralizingAbs)。各組分別培養(yǎng)1、4、7天； 4.平滑肌樣細胞的鑒定：形態(tài)學觀察結合免疫組化檢測平滑肌標志性蛋白α-SM-actin，判定有無平滑肌樣細胞的轉分化； 5.用逆轉錄—聚合酶鏈式反應法(R

3、T-PCR)檢測常氧和低氧組細胞TGFβ-1mRNA.； 6.免疫印跡(Western-blot)檢測常氧和低氧組細胞TGFβ-1蛋白的表達。 結果：1.免疫磁珠純化可剔除內皮細胞中的雜細胞，獲得高純度的內皮細胞。純化后的內皮細胞相差顯微鏡下觀察呈典型的鋪路石樣外觀，免疫組化檢測Ⅷ因子(FⅧ)和CD31呈陽性表達。 2.平滑肌樣細胞的鑒定：形態(tài)學觀察轉化細胞呈梭形，免疫組化檢測α-SM-actin呈陽性表達。

4、 3.各組細胞轉化率比較：第1天各組均未出現平滑肌樣細胞的轉化(圖7、8)；第4天和7天N組未出現轉化細胞，H組出現轉化細胞，且第7天H組轉化率明顯高于第4天H組轉化率(P＜0.05)；阻斷TGFβ1的作用后，第4天和第7天H+TGFβ1NeuAbs組的轉化率分別低于其對應的H組(P＜0.05)，其余各組均未見轉化細胞。 4.低氧可增加肺動脈內皮細胞TGFβ1mRNA和蛋白的表達(P＜0.05)。 結論：1.磁珠分選