HnrnpA1在胚胎干細(xì)胞向平滑肌細(xì)胞分化中的作用.pdf

1、動脈粥樣硬化是一種慢性，中大型血管疾病，通常由于內(nèi)皮細(xì)胞損害，導(dǎo)致血管內(nèi)膽固醇增生，平滑肌細(xì)胞聚集。正常生理下，血管內(nèi)膜的平滑肌細(xì)胞增殖能力較弱，呈現(xiàn)小山丘狀，表達(dá)一些相對特殊的分化基因，比如SM a-actin，SM-MHC，h1-calponin，SM22a，和smoothelin。病理狀態(tài)下，平滑肌從血管中層向內(nèi)層遷移并增殖，呈現(xiàn)鵝卵石狀。對于平滑肌細(xì)胞的兩種不同形態(tài)的來源一直備受爭議。現(xiàn)在的觀點認(rèn)為動脈粥樣硬化新生內(nèi)膜的平滑肌細(xì)

2、胞可能來自于存在于動脈壁及其周圍組織的干細(xì)胞。
　　目前在研究中的干細(xì)胞主要分成:胚胎干細(xì)胞系，成體干細(xì)胞，誘導(dǎo)多能干細(xì)胞。結(jié)合各種細(xì)胞的優(yōu)缺點，雖然胚胎干細(xì)胞系有免疫排斥和道德倫理兩大劣勢，但是建立干細(xì)胞庫，運用MHC和ABO血型抗原匹配可以有效的解決這兩個問題。所以結(jié)合胚胎干細(xì)胞的全能性(pluripotent)，它將會是研究細(xì)胞分化最好的體外模型。
　　hnRNPA1屬于保守的不均一性核糖核蛋白家族，是RNA結(jié)合蛋白中

3、的一員。據(jù)報道，hnRNPA1主要有四大功能:影響轉(zhuǎn)錄，影響mRNA剪切，核穿梭作用，影響micro-RNA的生物合成。已有報道，hnRNP的改變會影響轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的不同RNA代謝的過程，這種改變也參與癌癥，神經(jīng)降解性疾病和Alzheimer癥。
　　轉(zhuǎn)錄水平的精密調(diào)控與許多重要疾病，比如癌癥的發(fā)生，神經(jīng)元細(xì)胞的退化，動脈粥樣硬化平滑肌細(xì)胞的去分化等密切聯(lián)系。我們此項研究，以當(dāng)今科學(xué)界最新的發(fā)現(xiàn)-動脈粥樣硬化新生內(nèi)膜的平滑肌細(xì)胞可能

4、來自于存在于動脈壁及其周圍組織的干細(xì)胞為理論依據(jù)，結(jié)合小鼠干細(xì)胞向平滑肌細(xì)胞分化的體內(nèi)體外模型，研究轉(zhuǎn)錄翻譯水平hnRNPA1蛋白調(diào)節(jié)平滑肌細(xì)胞的分化的分子原理。
　　我們之前的核蛋白組學(xué)分析試驗發(fā)現(xiàn)，在早期小鼠平滑肌細(xì)胞分化的過程中，hnRNPA1核蛋白的表達(dá)水平有所上調(diào)。我們猜測hnRNPA1與平滑肌細(xì)胞分化有關(guān)。PCR，western證明了hnRNPA1在平滑肌細(xì)胞分化過程中與分化基因呈正調(diào)控關(guān)系。免疫雙熒光法顯示了分化平滑

5、肌細(xì)胞，發(fā)育胚胎心血管形成和成體心臟組織中，hnRNPA1核蛋白主要定位于核與核周。之后，功能缺失實驗和功能獲得性實驗檢驗了hnRNPA1基因在平滑肌細(xì)胞分化基因表達(dá)中的必要性和細(xì)胞特異性（僅限于平滑肌細(xì)胞中）。隨后，體內(nèi)Matrigel plug平滑肌分化實驗得到了相同結(jié)果。隨后我們進(jìn)一步探尋了轉(zhuǎn)錄因子hnRNPA1作用的靶位點。actinomycin D，Luciferase實驗，chip法證明了hnRNPA1在轉(zhuǎn)錄水平通過與分化基